• Forum - échantillon, Anticorps, Enzyme

dosage immunologique

Dans le premier cas, tu coates tes puits avec un anticorps dirigés contre la substance à détecter, par exemple anti IL2. Ensuite tu incubes ton échantillon (sérum, surnageant de culture,...) et tu révèles avec un deuxième anticorps couplés à une enzyme. Cette enzyme ve dégrader son substrat qui a été choisi pour changer de couleur lorsqu'il est hydrolysé.  [...] Je permets donc juste une dernière question, plus pratique. Il y a donc au moins deux étapes avant la révelation (1/ incubation de l'échantillon biologique à tester et 2/ dépôt du 2ème anticorps couplé à l'enzyme). mais en pratique lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait à la maison.  [...]

[Immunologie] immunoblote

bonsoir, si c possible de m'expliquer le principe d'immunoblote je c que c une électrophorèse qui a un rapport avec un anticorps mais j'ai pas bien compris merci.  [...] Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...]

[Immunologie] Elisa

ELISA ou Elisa est l'acronyme d'un examen de laboratoire appelé en anglais. Enzyme-linked immunosorbent assay = essai d'un immunosorbent lié aux enzymes. Synonyme. EIA = enzyme immuno assay. C'est une technique biochimique utilisée en immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon.  [...] Vu que le test ELISA peut être utilisé aussi bien pour évaluer la présence d'un antigène que celle d'un anticorps dans un échantillon, c'est un outil efficace à la fois pour déterminer des concentrations sériques d'anticorps (comme pour le test HIV ou le virus du Nil) que pour détecter la présence d'un antigène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Methode sandwich ACTH

le dosage radioimmunologique de l'ACTH est classiquement réalisé selon la méthode sandwich du kit ELSA-ACTH où le premier anticorps monoclonal en excès est adsorbé sur une phase solide. décrivez en détail cette méthode.  [...] Bonjour, Elisa sandwich est une méthode qui permet la détection d'antigènes par des anticorps monoclonaux. tout d'abords il ya fixation d'Ac sur un support solide, puis on ajoute l'échantillon, s'il contient l'antigène, il sera fixé spécifiquement par les Ac, on fait un lavage pour éliminer l'excès, et on ajoute un 2ème Ac spécifique de l'antigène et qui est couplé à une enzyme.  [...]

Biotine - streptavidine

Donc, en gros, je pense que ta manip' consiste à mettre en contact (sur une colonne ou un échantillon fixé) les anticorps de capture. Ces anticorps ont très proabalement la streptavidine accroché au fragment Fc. Il suffit alors d'ajouter la biotine marquée (par fluorescence, chimique, enzymologique.  [...] ..). Tout dépends de la manip' et du type d'éachantillon. Cependant, pour que le dosage (quantitatif) puisse se faire, il faut que la biotine soit en excès (en gros que tout les sites des streptavidine soient occupé par une biotine).   [...]

Analyse des cellules marquée par cytométrie de flux.

L'échantillon que l'on soumet au laser, ce sont des anticorps qu'on a modifié dans le but d'émettre une certaine fluorescence selon les co-récepteurs CD4, CD8 etc qu'ils rencontrent dans l'échantillon.  [...] On fait aussi beaucoup allusion à anti-anticorps,c'est l'anticorps qu'on a modifié ça, simplement.  [...]

[Biochimie] facteur de purif et rendement

L'activité totale de l'enzyme est mesurée dans la totalité de l'échantillon afin de savoir quelle quantité d'enzyme fonctionnelle on a avant et après la purif.  [...] L'activité spécifique, c'est l'activité enzymatique par mg de protéines. C'est donc assimilable à une concentration d'activité enzymatique. Au final, rien de bien différent avec l'exemple de la vitamine C énoncé par Mrikzik. Mais étant en présence d'une enzyme, on raisonne en terme d'activité et non de quantité d'enzyme.  [...]

[Biochimie] calcul activité enzymatique

On réaliser une mesure enzymatique de chaque fraction en introduisant 10 µL d'enzyme avec du pnitrophenyl acetate comme substrat du pnitrophénol se forme.  [...] c'est une enzyme capable de cliver le meme substrat que l'esterase mais qui est éluée à une concentration en sel superieure à celle de l'esterase.  [...]

Biochimie enzymo excercices

Pour le premier exercice, si ton enzyme est de type michaelien et que ta concentration de substrat est trés fortement superieur au Km, alors la vitesse initiale est egale à la vitesse maximun qui vaut. Vm = kcat*[Et].  [...] PS. en general, on calcule l'activité specifique d'une preparation enzymatique en verifiant bien que l'enzyme travaille en vitesse initiale, dans un souci de comparaison possible entre manip.  [...]

Traitements des données en QPCR

Je fais actuellement de la QPCR après une technique de ChIP (chromatin immunoprecipitation) et je me pose quelques questions sur le traitement de mes données. Je dois en effet comparer l'échantillon sans anticorps (ou normalement il ne doit pas y avoir d'ADN) avec l'échantillon d'ADN immunoprécipité.  [...] Dans une première manip, je vais faire deux courbes standart (une pour le gène de référence et une pour le gène d'intérêt) et je vais mettre tous mes échantillons (ADN immunoprécipité, plus le tube sans anticorps ) avec chacun des deux couples de primers.  [...]