• Forum - Eau, Tampon, Extraction

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

Je me dis qu'il faut certainement le préparer dans l'eau mais du coup, je fais diluer le tampon d'extraction de ma protéine. Dans la publication, les auteurs ne spécifient rien. Pourriez vous m'éclairer svp.  [...] Effectivement, à ta place, je diluerai les solutions stocks dans de l'eau. Il suffit juste que tu adaptes leur concentration pour qu'in fine tu obtiens la bonne concentration finale dans ton tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de l'adn

J'ai extrait de l'ADN génomique bactérien, mais je me pose la question de la durée que je peux le conserver (c'est pour faire des PCR ensuite).   [...] Selon vous, combien de temps ces ADN peuvent être conservés dans un bon état, à -20°C, à 4°C Sachant que les ADN bruts sont dans le tampon d'élution du kit d'extraction, et les ADN dilués dans de l'eau DNase-RNase Free.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

idéalement il faut utiliser le même tampon, en effet, puisque certains composés de certains tampons ont une absorbance propre. Après, ça dépend des conditions de mesure, par exemple moi qui mets 1 µL d'échantillon dans 1mL de réactif, je ne me pose pas la question.  [...] je ne parle pas d'ici de la dilution de l'échantillon,mais je parle de la dissolution de SBA.Est-elle dans de l'eau distillée ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

Pour réaliser l'extraction des enzymes de l'orge, j'ai procédé à un broyage de grains d'orge avec de l'eau distillée puis à une filtration et enfin une centrifugation pour récuperer les enzymes.  [...] Cependant, si ton enzyme est robuste, il n'est pas étonnant qu'une extraction à l'eau t'es permis de mesurer tout de même une activité.  [...]

[Biologie Moléculaire] probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

De l'ADN a été extrait à partir de pulpe de tomate et ensuite stocké au congélateur.Je pars donc ensuite de cette extraction (2microlitres) que j'ajoute à 48 microlitres d'une solution contenant de l'eau, un tampon, des bases nucléotidiques, les primers REVERSES et FORWARD ainsi que la TAQ polymérase.Ensuite on lance la PCR pour 40 cycles.  [...] Peut etre que tu n'a tout simplement rien amplifié et que c'est l'ADN génomique n'est pas sorti du puit... Essaye d'autres primers sur ta solution d'ADN pour voir si autre chose peu etre amplifié et ainsi migrer correctement dans ton gel.   [...]

L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae.  [...] Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je dois réaliser une extraction d'ADNg à partir de cellules de lignée lymphocytaire. Je possède déjà les culots cellulaires congelés, et j'ai déjà un protocole d'extraction phénol/choloroforme. Mon seul souci, c'est que je n'ai pas de tampon de lyse maison pour mes cellules, ni de protocole de lyse.  [...] J'ai cherché sur ce forum, et Yoyo disait qu'il avait un protocole d'extraction ( http.//forums.futura-sciences.com/se...archid=4618296 ). Si tu lis ce message Yoyo, et que ton protocole parle d'un tampon de lyse, pourrais-tu me l'envoyer par MP Je t'en serai très reconnaissant.  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

Après avoir réaliser une extraction d'ARN de bacteries issue de l'eau avec un kit QIAGEN, je dépose mes échantillons avec du bleu de dépot pour ARN et là se produit une chose pas courante. Au lieu de que mon échantillon se retrouve au fond de mon puit (gel 2,5% agarose et tampon TE 1X tout a fait normal), celui ci se voit revenir à la surface et se dissipe dd'un coup dans mon gel.  [...] D'autant que pour les extractions d'ARN les protocoles conseillent de ne pas laisser evaporer l'alcool avant la resuspension finale de l'ARN.  [...]

Na-bisulfite (NAHSO3) , rôle ???

Je ne l'ai jamais utilise dans le cas d'extraction d'ADN, mais dans le cas de purification/extraction de proteines. Il agirait comme anti-oxydant.  [...] J'ignore le rôle du bisulfite de sodium dans le cadre d'un tampon d'extraction. Je voulais juste signaler qu'il pouvait aussi être utilisé pour une mutagenèse. d'où l'intérêt de remplacer C par U pour introduire des mutations ponctulelles.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] Pour bien faire les choses, tu devrais réaliser ta gamme BSA étalon dans le tampon d'extraction, comme ça plus de problème avec la BSA du tampon.  [...]