• Forum - Digestion, Restrictions, Fragment

[Biochimie] Poids plus élévé après digestion enzymatique

tu sais quel est le profil que tu dois obtenir après digestion si c'est un produit PCR c'est linéaire. Tu n'as qu'un fragment apres digestion C'est pas du a une structure de repliement.  [...] C'était une digestion des sites de restrictions d'un fragment que j'avais amplifié par PCR, sur mon gel je ne dois obtenir qu'un seul fragment d'environ 1000bp.  [...]

[biologie moleculaire] Cartographie du genome

dans la catographie physique du genome humain je ne comprend pas comment les clones s ordonnent le long du chromosome et comment peut on grace a cela connaitre la sequence exacte est ce qu on doit faire un sequencage avant c pas clair dutout merci pour votre aide.   [...] Pour realiser une cartographie physique on sequence les différents clones, ces clones possèdent des fragments du chromosome a cartographier et ses fragments sont chevauchant (car digestion partielle par des enzymes de restrictions) donc les sequences des différents fragment sont ensuite alignées par ordinateur grace aux sequences chevauchante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...] Une derniere question piwi je ne comprends pas ce que veut dire. Digestion de restriction de la PCR et du fragment dans l'étape 6.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

Jusque là tout vas bien. sur notre ADNg. on a bien deux sites de restrictions adjacents HindIII qui donnent un fragment de 0,3Kb et qui hybrident avec ma sonde H.  [...] Ça se complique un petit peu, j'émets alors l'hypothèse suivante. sur notre ADNg il y a deux sites de restrictions NcoI adjacents qui donnent un fragment de 1,8Kb. Pour expliquer les 0,8Kb, j'ai pensé à un intron situé au centre de mon fragment d'ADNg NcoI/NcoI.  [...]

[Génétique] Rflp

1) -. sur le chromosome, un frgament de restriction est-ce bien un fragment entre deux sites de restrictions ( la ou les enzymes de restrictions peuvent couper l 'adn ).  [...] Le principe est alors de digérer l'ADN, afin d'obtenir des fragments puis de les faire migrer. Si il y a une différence, elle se manifestera par la modification de la longueur d'un fragment, ou bien un fragment supplémentaire, ou bien un en moins, en tout cas une modification du profil de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] ligation

Par exemple, lorsque tu fais ta digestion, il est conseillé de faire des témoins négatifs (sans enzymes de restrictions), des témoins positifs (lors d'une double digestion, tu vas faire deux témoins de simple digestion), puis tu vas faire migrer le tout (ton produit de digestion, tes trois témoins) sur des gels d'agarose.  [...] - Soit on clive le vecteur avec deux enzymes de restriction différentes qui génèrent des bouts collants incompatibles. L'insert est clivé avec les même enzymes. Cette méthode a l'avantage d'empêcher la recircularisation du vecteur et favoriser une insertion orientée de l'insert dans le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restrictionest ce par électrophorèse.  [...] Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

On obtient un gel avec des produits de PCR de colonies bleues et blanches, de plasmides digérés par enzymes de restriction et des plasmides non digérés provenant de colonies bleues et blanches. (= 6 bandes)+marqueur de taille.  [...] une étape de digestion (ouverture) de ton vecteur plasmidique (là où tu as inséré ton produit de PCR) par diverses enzymes de restriction.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

donc, avant digestion, on regarde la tête de l'ADN *non digéré* sur gel. Après digestion, on compare. si notre ADN a la même tête, c'est FAIL. si on a des bandes qui correspondent à ce qu'on a calculé d'après les positions des sites de restrictions (les regexp), c'est PASS.  [...] Le nombre de fragments dépend du nombre de site de restriction qu'il y a sur ton plasmide. S'il y a deux sites, tu auras 2 fragments linéaires, 3 sites 3 fragments etc. Le truc c'est que tu auras forcément un mélange des formes non digérées et des formes digérées (voir des formes partiellement digérées).  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.  [...]