• Forum - Dialyse, Quantité, Protéines, Concentration

Production protéine recombinante E.coli

Aprés une première dialyse je dose ma quantité de protéines et j'ai une concentration de 2,5mg/ml ensuite à la dernière dialyse j'ai une concentration de 0,6mg/ml. J'observais des agrégats que j'ai éliminé par centri.  [...] Pourquoi la proteine s'agrége c'est seulement cela qui explique la différence de concentration, la technique de dialyse est-elle efficace sinon pourrais-je utiliser une autre technique comme la filtration.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines

Si vous considérez les chiffres absolus qui sortent du spectro, ce n'est pas une quantité, c'est une concentration qu'il faut rapporter au volume de protéines à chaque étapes. Normalement le nombre total devrait diminuer, si il augmente c'est que vous avez un souci dans la conduite de vos manip.  [...] Oui mais si vous faites une dialyse après purif vous augmenterez la concentration (sans augmenter la quantité on est d'accord).  [...]

[Biochimie] Qu'est-ce qu'un sac à dyalise ?

Bonjour, je suis désolé si je ne me trouve pas au bon endroit pour poser cette question... Enfet j'ai sous les yeux une question. Quel est le principe du sac à dialyse qui est formé d'une membrane semi-perméable (imperméable aux protéïnes) et je n'arrive pas a répondre a cette question... merci beaucoup pour vos réponces.  [...] La dialyse est une purification qualitative. C'est à dire qu'après dialyse, la concentration en protéines de taille supérieure à la porosité de la membrane de dialyse sera inchangée. Par contre, le degré de pureté sera supérieur.  [...]

[Biochimie] Dialyse et réactions colorées des protéines

Théoriquement seul les sels donc, sortent du boudin et les protéines restent à l'intérieur. Il faut que tu te renseignes sur la résolution de la membrane. la taille des mailles permet-t-elle aux protéines de sortir ou est-elle trop petite.  [...] alors je pense que ton résultat est normal. tu as montré que les protéines restent à l'intérieur du boudin de dialyse et que seuls les sels sortent (et autres petites molécules).  [...]

[Biochimie] Principe de la dialyse

Le soluté S traverse et diffuse à travers la membrane semi perméable du sac du dialyse dans le sens de gradient de concentration.  [...] Le tampon de dialyse ne contient pas le soluté au début de la dialyse, à l'équilibre les concentrations internes et externes sont égales. En utilisant un grand volume du tampon de dialyse et en le renouvelant la concentration du soluté dans le sac diminue et finie par être négligeable et le soluté est ainsi éliminé par exemple d'un extrait protéique.  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Ensuite fait une étude comparative entre les deux (SDS-PAGE pour regarder la quantité de ta protéine et southernblot si tu as un anticorps et fait également ton test d'activité avec les deux extractions et regarde si tu vois des différences).  [...] Ensuite concernant ta seconde question. Difficile a répondre sans connaitre ton protocole expérimental (composition tampon, volume tp vs volume extrait enzymatique,...). Peux tu me donner quelques élements de réponses si ce n'ai pas trop confidentiel Mais sache qu'il existe des méthodes pour changer de tampon après ton extraction pour conditionner ta protéine dans un autre tampon... (Dialyse, unité de concentration,...).  [...]

[Biotechnologie] Gel filtration

Tout d'abord merci de la réponse rapide, mais je posait plus la question pour savoir l'utilité, car dans mon protocole je sors d'une chromatographie d'affinité au cobalt, ensuite je clive le tag histidine de mes protéines, dialyse toute la nuit, ensuite je repasse sur du cobalt pour eliminer les prot non clivées, et la je fais la GF, et j'avoue trouver ça étrange sachant qu'on viens juste de purifier la prot, et qu'on l'a nettoyé de l'imidazole (dialyse).  [...] La gel filtration a aussi l avantage de pouvoir utiliser le tampon que l'on veut en fin de purification differente concentration en NaCl (tres utile apres une echangeuse d ion), et dans ton cas, meme apres dialyse c'est une facon d etre sur de ne plus avoir d imidazole.  [...]

denaturalisation protéines

L'urée est surtout utilise pour solubiliser les protéines. Certaines protéines forment des corps d'inclusion (aggrégation de protéines) lorsqu'elles sont surexprimées, si on veut les purifier on les solubilisent en ajoutant de l'urée ou du chlorure de guanidium.  [...] Certaines protéines vont se replier naturellement lorsque l'urée va etre enlevée (par dialyse entre autre) alors que d'autres protéines resteront dénaturées.  [...]

[Divers] Albumine dénaturée

Je me trompe peut-être mais vu ta formulation il semblerait que 65 kDa soit pour toi le nom d'une protéine...C'est la masse de la protéine. Beaucoup de protéines font cette masse, et un anticorps fait plus de 65 kDa (il fait 150 kDa).  [...] De ces fichiers (j'en ai trouvé d'autres sur un autre site), j'ai déduit qu'une des trois principales était constituée de 3 chaînes d'aa, et que les deux autres n'en possédaient qu'une. J'ai aussi utilisé le log MESURIM pour analyser le résultat d'une électrophorèse, j'en ai tiré les proportions que chaque protéines (3) ont dans l'oeuf.  [...]

[Biochimie] Dialyse

Après plusieurs bains on peut progressivement eliminer le détergent du sac, la concentration du détergent devient inférieur a la concentration micellaire critique. Les lipides reconstituent alors spontanément une bicouche.  [...] mes questions sont, qu'est ce que exactement la solubilisation de la membrane le détergent est nécessaire pour la solubilisation de la membrane, c'est pourquoi on cherche a s'en débarrasser après.   [...]