• Forum - Détergents, Lipides, Domaines

propriétés des détergents

Les membranes biologiques sont compartimentées en domaines plus ou moins fluides. La fluidité corrèle avec la solubilité en détergent et les domaines les plus structurés (rafts, DRM) peuvent ainsi être isolés grâce à leur relative insolubilité dans certains détergents.  [...] Pour en déduire le type de DRM auquel chaque isforme est associée il faudrait que je connaisse les capacités de chacun de ces 4 détergents à solubiliser préferentielllement tel ou tel type les lipides retrouvés dans ces domaines (exemple. le chaps solubilise-t-il plutot des DRM à cholestérol, Le triton solubilise-t-il plutot les DRM enrichis en SM etc... ).  [...]

[Biochimie] protéine de microdomaines lipidiques

Pour ma part, j'ai passé les congés de Noël au labo car je voudrais a tout pris caractériser la présence de ma petite protéine préférée dans des microdomaines lipidiques membranaires résistants aux détergents (DRM). ces domaines sont très riches en cardiolipine mais très pauvres en cholestérol, contrairement aux rafts classiques.  [...] Je ne peux donc pas utiliser les agents de dispersion classiquement utilisés pour la solubilisation des protéines des rafts tels que le MßCD ou la filipine. Connaissez vous un moyen de modifier la teneur en cardiolipine d'une membrane in situ, de provoquer sa dégradation ou toute modification susceptinle de disperser ce type de DRM.   [...]

[Biochimie] effet toxique des AINS

l'eau oxygéné et les superoxide sont des poisons pour les organismes, la catalase agit comme detoxifiant ( je n'ai plus la réaction catalysée en tête mais on peut la retrouver facilement sur internet... dsl) ainsi plus la catalase est active plus le sang est polué par des dechets toxiques issus des AINs (d'après ce que j'ai compris de vos posts ^^).   [...] Ensuite, les détergents (triton, SDS,..) sont utilisés pour solubilier les lipides. La membrane plasmique étant composé de lipides, cela permet donc de casser la membrane des hématies pour récupérer le contenu intracellulaire (cytoplasme uniquement, les hématies étant anuclées), où se trouve les enzymes d'intérêt.  [...]

[Biologie Cellulaire] Virus: fusion vs endocytose

Voici donc où j'en suis rendu. J'essaie de compléter les in et les out des différentes classes de virus, afin d'identifier ceux qui ont un processus intégral d'endocytose-exocytose.   [...] (Petite remarque. Il faut voir que l'enveloppe lipidique est en réalité un désavantage pour le virus car elle le fragilise. les lipides qui la composent rendent en fait le virus sensible aux attaques de différents agents tels les détergents ou un pH acide.).  [...]

extraction et séparations des composants d'une membrane

L'idée d'une précipitation des protéines a par contre l'air interessante je vais essayer de creuser dans cette voie la, couplée à une solubilisations des lipides ca pourrait donner des résultats interressants mais je ne suis vraiment pas expert dans ce domaine et je ne dispose que du labo du lycée.  [...] Enfin si tu veux extraire les prtotéines membranaires, si tu précipites... les protéines, je crois que tu précipites aussi les lipides...puisque en fait les protéines membranaires sont toujours (à ce stade) accompagnées de lipides et de détergents dans des structures de type micelle... donc pas facile.  [...]

[biologie moléculaire] Identification d'une molécule

Pour la suite, cette macromolécule est chauffée en présence de détergents et d'un agent réducteur des ponts disulfures. Le mélange est séparé par élctrophorèse et visualisé à l'aide d'un colorant spécifique. Quelles sont les macromolécules visibles par cette technique et quels leurs éléments constitutifs.  [...] Il a raison de parler de protéine car les expériences qui ont été faites après l'identification de la phosphatidylsérine sont typiques d'une analyse de protéine. En effet, s'il n'y avait que des lipides, où serait l'intérêt de traiter avec un agent réducteur des ponts disulfures et de faire migrer sur électrophorèse.  [...]

additifs pour la cristallisation des proteines membranaires

En effet on utilise des détergents pour extraire la protéine membranaire, car ils solubilisent la membrane et rend la protéine soluble en protègeant la ceinture hydrophobe de la protéine (les détergents sont chimiquement très proches des lipides), et il y en a de toutes sortes.  [...] Cependant il n'y a pas un coktail d'additif et de détergents précis. Il y en a beaucoup, et tu n'es pas sans savoir que cristalliser une protéine membranaire c'est la croix et la bannière (y a qu' a voir la PDB) donc en général on fait les tampon de cristallisation à taton (maintenant ce sont même des labos ultra équipé avec de la robotique qui s'amusent à faire des centaines de cribles pour trouver le bon tampon qui va bien).  [...]

[Biologie Cellulaire] Isolement d'un compartiment cellulaire

-c'est une technique de séparation des différentes parties d'une cellule au moyen d'une homogénéisation puis d'une centrifugation differentielle pour donner des fractions nucléaires, mitochondriales, microsomale et des fractions solubles.   [...] -j'aurais dit pour tous types de cellules contenant des proteines (car fractionnement avec solvant, detergents et digestions enzymatique...) mais y a-t-il des proteines dans les chloroplastes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Variations de température et remodelage de la membrane

L'étude pourrait se faire sur certaines levures ou bactéries étant sujets à de telles variations thermiques. On pensait pouvoir isoler la bicouche lipidique par choc osmotique et usage de détergents puis centrifugation (là c'est déjà techniquement plus dur.  [...] La lipidomique est un domaine assez cher (chromatographie liquide, HPLC, spectrometrie de masse...) et ne membrane contient des centaines d'espèces différentes.  [...]

[Biochimie] Séparation en gradient sucrose

je cherche à démontrer la présence d'une protéine transmembranaire dans des microdomaines lipidiques résistants aux détergents (type Raft) par ultracentrifugation sur gradient sucrose 5%-40%. Malheureusement, cette protéine a également la propriété de former des supracomplexes de très haut Poids moléculaure qui sédimentent également dans des fractions sucrose de faible densité sur ce même type de gradient.  [...] En complément de l'idée de Gorben qui suggère de regarder la présence de lipides dans la fraction que tu prélèves (si possible les lipides enrichis dans les rafts comme cholestérol et sphingomyéline), je dirais que tu peux faire un western blot sur la fraction avec un anticorps dirigé contre ta protéine, et un anticorps dirigé contre un marqueur des rafts (la flotiline il me semble).  [...]