• Forum - Detection, Protéines, Solution

[Biochimie] Détection des proteines d'une solution acqueuse.

Je dois élaborer un test afin de détecter et quantifier la présence de proteines et d'acide aminés libres dans une solution acqueuse.  [...] c'est le bleu de coomassie, un colorant, qui absorbe à 595nm lors de sa complexation avec les protéines (residus aromatiques et hydrophobes je crois).  [...]

[Biochimie] Purification de la beta-gal

On utilise du bleu de Coomassie (réactif de Bradford  RB) qui se colore en bleu lorsqu'il est lié aux protéines. On dépose 200 µL de RB (préalablement dilué au 1/5 dans de l'eau distillée) dans chaque puits et on y ajoute 20 µL d'une fraction dans l'ordre de sortie de la colonne.  [...] Je serai tenté de dire que dans les fractions issues de l'extrait bactérien nous n'avons pas de protéines chargées positivement et/ou neutres ainsi que dire que la béta-gal est la dernière protéine a s'être retirer de la colonne (car pas de coloration bleu dans la fraction 10 après ajout du bleu de coomassie) mais je trouve que cette conclusion est très vulgaire et je doute que ce soit cela.  [...]

Détection de protéines mal repliées par western blot?

Si ce n'est que pour une protéine, cela doit être possible de voir un changement de taille de la protéine en condition non dénaturante. Une protéine mal replié étant généralement plus grande que celle bien replié, elle migrera moins vite. Mais l'insuline est vraiment petit en taille, et je ne sais pas s'il est possible de voir clairement un tel changement de conformation.  [...] Si votre objectif est ensuite de regarder toute les protéines (donc le protéome), le DIGE -2D (2 dimensional difference gel electrophoresis) est probablement la technique la plus adapté (toujours en condition non dénaturante).  [...]

Transcription or not transcription

Les tetracyclines et macrolides sont des ATB qui inhibent la synthese peptidique. Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non.  [...] Si tu as un problème à détecter les ARN, ca vient peut être de la détection en elle même. En passant par une détection des protéines (électrophorèse 2D), tu pourrais voir si il y a un changement au niveau de le synthèse des protéines. Ca ne t'aide peut être pas directement pour ta technique, mais ca peut permettre de vérifier si c'est un problème de méthode ou de principe.  [...]

Levures et TAP tag à grande échelle

Il existe une collection de levures ayant des genes taggés en Ct par le TAP-TAG. il est ensuite possible de purifier les proteines.  [...] La technique est utile pour émettre des hypothèses sur la fonction d'une protéine inconnue. en trouvant dans un même complexe des protéines de fonction connue, on peut avoir une idée de la fonction de la protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'immunoblot ou Western blot est une méthode qui permet la détection et l'identification de protéines spécifiques dans un échantillon biologique.  [...] Exemple d'applications ben comme dans le sujet que j'ai mis en lien ^^ (pour détecter des protéines ubiquitines, c'est à dire des protéines qui marquent les protéines à éliminer, éliminés par les protéasomes situés dans les noyaux et cytosoles des cellules d'ailleurs).  [...]

[Divers] Dosage Vanilline par HPLC

letters in applied microbiology 2007 Jan.44(1).62-7. Vanillin production from simple phenols by wine-associated lactic acid bacteria.   [...] Je suppose que tu as trouvé la solution à ton souci. Peux-tu me donner les conditions que tu as utilisées (colonne, solvants, débit, détection...).  [...]

Épigénétique

Génétique car les mécanismes épigénétiques sont eux-mêmes mis en place par des protéines codées par des gènes et la détection de mutations provoque la mise en place de système de réparation qui nécessite une augmentation de l'expression de protéines réparatrices (ce n'est qu'un exemple parmi tant d'autres).  [...] Environnemental car une cellule est en connexion permanente avec le milieu extracellulaire de manière mécanique et de manière biochimique grâce à des récepteurs membranaires sensibles à la présence de facteurs de croissance et d'hormones par exemple. Ces détecteurs de l'environnement qui entoure une cellule sont liés à des voies de signalisation qui active des mécanismes épigénétiques qui adaptent l'expression des gènes en fonction de l'environnement de la cellule.  [...]

[Biochimie] dosage des proteines

..incubation...6_ inoculation des AC de detection couplés a la peroxidase...incubation..lavag e...7_ajout de la solution de lenzyme peroxidase...lecture sur le lecteur elisa a 495nm.  [...] bradford. 1_solution de proteine reference BSA dans des tubes a concentration ascendante,volumes finaux egaux ajuster avec du NaCl, 2_solution de la proteine a doser (x) dilué, 3_ reactif de bradford que l'on ajoute dans les tube,meme dans le banc (qui ne contien rien),..courbe detalonage.  [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

FLAG c'est une étiquette protéique qu'on ajoute aux protéines (protéine de fusion) justement pour faciliter sa détection, ou sa précipitation (avec un anticorps anti flag).  [...] Pour FLAG c'est aussi ce que j'aurais dit à la base, mais dans l'article avec un petit Ctrl+F toutes les apparitions de FLAG se font quand ils nomment le vecteur (pCMV-FLAG), je l'ai pas retrouvé en dehors du vecteur, pour designer la protéine, donc pas sur que dans le contexte ca soit ca, si (pas lu l'article en entier).  [...]