• Forum - Detection, ARN, Particulier

[Biotechnologie] techniques de détection

Dans mon cours j'ai étudié divers outils moléculaires de détection comme le southern et northern blots, random priming, etc etc, et j'aimerais savoir quand utiliser quel outil.  [...] Le Northern Blot permet la détection d'un brin d'ARN particulier.  [...]

[Biochimie] qPCR :

Il se peut que le problème vienne de l'age de la souris, j'ai regardé dans des papiers, et c'est vrai qu'ils ne precisent pas l'age des souris d'ou ils ont extraits l'ARNm, à part dans un des articles où ils prelevent les testicules dans des souris de moins d'un mois alors que moi je l'ai fait chez une souris qui devait avoir 2mois et demi.   [...] Si tu as accès à ce type de matériel, il pourrait être intéressant d'essayer un western blot sur tes cellules (détection de la protéine) ou un northern blot (détection des ARN).  [...]

Révolution dans le domaine de la microscopie ?

Moi sceptique car la résolution d'un microscope dépend d'abord de la source lumineuse utilisée. Si le microscope élect. (ME) donne une meilleure résolution, c'est d'abord parce que la longueur d'onde des é est beaucoup plus petite que celle d'un photo. Ensuite elle dépend de l'optique et particulièrement de la qualité des lentilles objectifs.  [...] Je crois effectivement qu'esperer voir un ARN en AFM ou microscopie electronique est illusoire, surtout si on souhaite le voir dans le virus. Je ne parle meme pas de le voir sortir d'une particule virale par ces techniques Pour le moment, en imaginant un systeme assez ingenieux d'amplification de signal in vivo (comme ce que suggerait Steph, un couplage a une proteine fluorescente ou inserer des bases modifiees pour une detection ulterieure) couple a la microscopie confocale ou mieux, 2 photons, on pourrait peut etre esperer detecter quelque chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle interne en RTqPCR

Je dois rendre un rapport concernant une étude portant sur la détection du virus de la FCO (en médecine vétérinaire). Pour cela, on utilise deux RT-q-PCR en parallèle, chacune spécifique d'un segment d'ARN (le virus est un virus à ARN). Mais on utilise également une RTqPCR pour la détection de la béta actine en tant que contrôle interne, et ceci dans des échantillons négatifs ou positifs pour le virus.  [...] Pour ces raisons (et quelques autres), on utilise un témoin interne, c'est à dire on amplifie un ARN qui se trouve normalement à concentration constante dans notre échantillon (du moins tout le temps exprimé à un niveau détectable). Ca en fait ainsi un témoin positif à l'intérieur même du puits.  [...]

[TS] à quoi sert l'HCG ?

L'hormone gonadotrope chorionique humaine (on parle de la beta ici j'imagine) est sécretée par l'embryon au moment de la nidation (~8 jours après la fécondation) Elle passe donc dans la paroie utérine puis le sang et la circulation systémique. Son dosage précoce permet donc de déterminer avec certitude la grossesse.   [...] En particulier, elle est éliminée dés la seconde semaine (à peu près) dans les urines ce qui permet sa détection simple via les tests de grossesse.  [...]

Rt-pcr

Elèves en 1èreS, nous faisons un TPE portant sur la rage (lyssavirus, génome à ARN). Nous en sommes à la partie du diagnostic et nous ne comprenons pas trop une chose. la détection des ARN du lyssavirus par la RT-PCR. Nous savons que la PCR sert à dupliquer un brin d'ADN.  [...] on peut alors chercher a détecter l'arn mais il faut savoir que l'arn est beaucoup beaucoup plus petite que l'adn génomique pour détecter alors un arn on utilise la RT-PCR pour pouvoir avoir beaucoup plus d'arn notre prof a la fac nous expliquer que c'est une technique extrêmement sensible et que dans un unique postillon humain on avait.  [...]

[Biochimie] Lac IQ et Tac promoteur

J'ai compris l'histoire du promoteur, de l'expression dans une bactérie,mais là je te parle du test NASBA,test de détection des ARN rétroviraux qui utilise la T7pol comme aplificatuer.Mais comment se fait-il qu'une T7pol de bactériophage puisse amplifier des ARN de virus comme HIV.  [...] Merci pour vos réponses, mais j'aurais voulu savoir pourquoi on utilise la T7 comme amplificatuer d'ARN rétroviraux,qy'est ce qu'elle a de particulier.  [...]

Transcription or not transcription

Tu bosses sur quel modele Parce que avec la tripotée de regulateur transcriptionnel qu'il y a chez certaines bacteries, ce serait pas etonnant qu'un arret de traduction bloque la transcription.   [...] Si tu as un problème à détecter les ARN, ca vient peut être de la détection en elle même. En passant par une détection des protéines (électrophorèse 2D), tu pourrais voir si il y a un changement au niveau de le synthèse des protéines. Ca ne t'aide peut être pas directement pour ta technique, mais ca peut permettre de vérifier si c'est un problème de méthode ou de principe.  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Chaque puits contient un micro réseau dans lequel il y a le gel de séparation qui va être en contact avec une électrode, cette électrode sera soumise à un haut voltage qui va séparé tes ARN sur le Gel en fonction de leur taille. Quand les ARN passent dans le gels ils se lient au dye et à la fin du micro réseau la fluo sera detectée par la machine et tu vas obtenir un graphe avec les fluo et le temps de rétention sur le gel.  [...] De plus, j'ai fait un rapide calcul. vous dites que vous avez un volume final de 40 microlitre à la fin de la RT et que vous mettez 1 microgramme d'ARN. Si mon calcul est juste, cela vous donne une concentration de 25 nanogramme/microlitre. attention vous êtes à la limite de détection d'une puce ARN Nano.  [...]

MS 2 phage RT-PCR Temps réel

Nous travaillons actuellement sur la détection du virus MS 2 phage par RT-PCR en temps réel. Pourriez vous nous donner des indications sur les amorces à choisir et sur la composition du mix réactionel. Nous avons un deuxième problème. comment réaliser une gamme étalon à partir d'ARN de virus Comment passer des µg/µL (concentration de notre ARN) en UG/L Merci.  [...] ou (si tu n'as pas la séquence détaillée). masse moléculaire moyenne d'un nucléotide x nombre de bases (attention si ADN double brin, il faut multiplier par 2).   [...]