• Forum - Demande, Plasmide, Concentration

calcul dilution plasmide

dans le protocole que j ai en nous demande de prendre 5ug du plasmide la concentration de mon plasmide quand je l ai verifier au nanodrop est de 43ng/ul.  [...] merci a toi donc v c est m/c maisla concentration est en ng donc converti en ug 5/0.043 c est 116 ul je pense que c est beaucoup vous aussi que ce que vous me conseiller de changer carrément le protocole en prenant 205ug de vecteur.  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Si vous avez le volume de votre échantillon, vous pouvez alors calculer des concentrations à chacune des étapes, si c'est cela que l'on vous demande.  [...] Comme on me demande la concentration je présume que je dois d'abord calculer la masse de plasmide ainsi que sa masse molaire, et en déduire la quantité de matière de plasmide, et diviser par le volume. Suis-je ok cette fois ci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Ceci dit la quantité de plasmide ne me semble pas etre la cause du soucis, vu que les trois premieres pistes ne contiennent que de l'ADNg si j'ai bien compris. Et la bande d'amplification est tres forte aussi.  [...] Là dessus il y a effectivement une petite remarque à faire. On voit que l'on a la même intensité de bande pour l'ADN produit à partir de l'ADNg et du plasmide. On peut penser ( ) qu'il y a pas mal de plasmide comme matrice pour les PCR. Du coup c'est vrai que l'on a du mal à imaginer que l'on ait mis autant d'ADNg.  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

Sachant que Rendement = (Concentration après purification) / (concentration avant purification), il me manque donc la concentration avant. On connait la concentration d'ADN (donc celle du plasmide) présente initialement. Cependant, pour connaitre celle des fragments présents (donc l'extrémté 5', après digestion) j'essaye cette formule. (Concentration ADN * (784/5484)). Donc.  [...] Je crois, la concentration initiale de l'ADN plasmique initiale EST juste la concentration initiale du fragment digéré dont tu as besoin, parce que pour un plasmide, il n'existe qu'UN fragment de 784 bp qui est celui que tu cherches (la moitié 5' du gène, oui ).  [...]

[Génétique] Plasmide

le plasmide se religue sur lui même et reforme un plasmide circulaire. C'est une réaction intramoléculaire qui est favorisée à faible concentration.  [...] Deux plasmide digérés, possédant donc des bouts cohésifs équivalent se ligue entre eux. Tu formes alors des concatémères. C'est une réaction intermoléculaire qui devrait être favorisée par l'augmentation de la concentration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzyme de restriction

Alors j'ai un plasmide qui fait 5858 paires de base et on nous dit que l'enzyme de restriction EcoR1 coupe a 1,a 948 et a 1582.On me demande de calculer la taille des fragments obtenus apres digestion du plasmide par EcoR1.Je me demande s'il faut soustraire a chaque fois du nombre total de paires de base du plasmide,le nombre de paires de base que coupe EcoR1Sachant que j'obtiens 3 fragments pour ce plasmide si je ne me trompe pas.  [...] une derniere petite question parcontre,on me demande de calculer aussi les fragments attendus dans le cas ou ou il y a plusieurs sites EcoR1 et ou la digestion serait incomplete.Je ne trouve pas cette question tres claire,donc je ne vois pas trop comment faire.  [...]

[Microbiologie] Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)

Quand je calcule la concentration je trouve 10ng.µL ce qui correspond bien à 200ng dans 20µL. Donc l'échantillon total présente 200ng de plasmide. Ensuite on prélève 10µL de solution à 10ng/µL soit 10*10 = 100ng que l'on dilue dans 10µL d'eau (Vt = 20µL) on obtiens une solution de 5ng/µL.  [...] On prend 10µL de cette solution soit 10*5 = 50ng de plasmide que l'on ajoute à 10µL d'eau, la nouvelle solution a une concentration de 2.5ng/µL ect...(Est-ce que j'ai bien expliqué le principe En fait je viens de me rendre compte en écrivant que je confondais les 50ng/µL avec les 50ng dans 20µL ce qui n'est pas du tout la même chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation ADN plasmidique insert

On me demande de préparer le protocole.nous avons un phage m13 en quantité de 20 à 50 ng que l'On fait digérer par une enzyme adéquate puis on traite à la phosphatase alcaline Pour éviter que le plasmide ne se referme sur lui même.  [...] Concernant les volumes, ils ne sont pas calculables tant que tu n'as pas la concentration de tes ADN dans les solutions mère.  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

On peut avoir une concentration à partir de la bande du produit PCR uhuh dire qu'on m'a toujours répété que la PCR n'était pas quantitative... Je pense que ça doit être loin d'être précis la lecture de l'intensité de la bande... le BET ne se fixe pas de la même façon sur tous les produits.  [...] La comparaison de l'intensité des bandes en BEt ou en SYBRSafe donne de bons résultats, à un facteur 2 près... Il faut avoir un standard, n'importe quel plasmide linéarisé dont la concentration est connue fait l'affaire. Il est prudent de faire une gamme de dilution du standard (entre 10ng et 500 ng) pour évaluer plus finement la concentration de l'échantillon.  [...]

toxicité des vaccins - Page 4

Moi j'en suis sur, ca fait partie de mon sujet de thèse L'aquisition de la résistance à un antibiotique pas une bactérie se fait généralement par transmission d'un plasmide contenant le gène codant la resistance. Ce plasmide représente une fois le stress passé (l'antibiotique n'est plus présent en concentration suffisante dans le milieu pour constituer une menace pour la bactérie) une dépense d'énergie supplémentaire.  [...] Je dois dire que j'ai lu certaines choses, surtout concernant la maturation du système immunitaire des enfants et la facilité avec laquelle il peut être perturbé, qui font que parfois je me demande si tout cela - au nom d'une légitime prévention - est bien raisonnable sur le long terme.  [...]