• Forum - Dégradation, Amorces, ARN, ADN

[Biologie Moléculaire] miRNA (ou microARN)

De ce que j'en sais, c'est un mécanisme découvert par hasard chez le ver Caenorhabditis elegans. Il consiste à la dégradation des ARN messagers (ARNm) d'une cellule eucaryote pas un systeme protéique appelé RISC (RNA-induced silencing complex). Ce système est activé par la présence de petits ARN double brin.  [...] Après pour leurs fonctions, les siRNA vont induire une dégradation des ARNm, alors que les miRNA semblent plutôt bloquer leur traduction.  [...]

[Génétique] problème d'extraction d'ADN

c'est pas mes premières manip j'ai effectué des extractions avec d'autres espéces et j'utilise bien évidament la protéinase k et le -4 degré pour une conservation à courte terme et j'ai pas eu ce type de problème et cette dégradation assez rapide d'ADN.  [...] Du génomique sur gel ça ne fait pas une seule bande mais un smear de hautes tailles. Après je n'ai pas vu dans ses dires que le profil de migration changeait après quelques jours. J'ai trouvé assez évasive la description de la dégradation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aide sur la qPCR

Moi quand j'ai fait de la PCR en temps réel en M2 on partait de 1 µg d'ARN pour faire la transcription inverse. C'est largement suffisant vu que tu n'as besoin que de quelques ng d'ADNc pour la PCR.  [...] Je n'ai rien à te proposer pour la PCR touch-down, mais pour la PCR en temps réel tu as par exemple cet article. L'inscription à Biotechniques est gratuite.   [...]

[Biologie Cellulaire] Tumeur cancéreuse et non cancéreuse

Normalement, une cellule qui possède des erreurs dans son ADN suite à des mutation ou autre, se suicide par un processus que l'on appelle l'Apoptose. Et je crois que les intervenants précédents ont également signalé que certaines mutations affectaient les éléments intervenant dans l'apoptose, rendant celle ci impossible.  [...] Les caspases clivent CAD (caspase-activated DNase) qui est alors active pour cliver l'ADN. Elles clivent aussi PARP pour empêcher la réparation de l'ADN, optimisant sa dégradation par CAD.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quels sont les causes des smires dans les produits PCR?

-la dégradation de l'ADN (mais normalement là je suis à l'abris... enfin je croyais).  [...] je dirais qu'un temps d'élongation trop courts donne aussi des smear, ou alors trop de cycles de PCR, ou encore des hybridations aspécifiques.   [...]

[Biochimie] Conservation ADN

je me suis arreter là (problème d'amorces non disponibles) vue qu'au final je compte faire une RAPD simple pour étudier la diversité inter et intra spécifique d'une collection de champignons.  [...] Si tu n'as pas manipé comme un cochon, ton ADN peut rester stable durant des années à 4°C. J'ai des tubes d'ADN génomique au frigo qui datent de 1991 (extraction SDS+Phénol, comme toi). ils ont servi l'année dernière pour faire un Southern blot (impossible s'il y a de la dégradation, même partielle), aucun problème.  [...]

[Biochimie] Ribose / Desoxyribose dans les acides nucléiques

Il y a pleins de regulations qui jouent sur la stabilité de l'ARN. Au niveau epissage, export du noyau, au niveau traduction, si l'ARN est abimé, par les miRNA etc.  [...] Mais parlons justement de cette régulation qui se fait par le biais de la dégradation des ARN. Quel est le rôle de la stabilité des ARNt, par exemple.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage à l'iodure de propidium pour suivi du cycle cellulaire

La deuxième dit que le potentiel ATPasique tend vers 0. De ce fait tous les transports actifs qui consomment de l'ATP et permettent l'efflux de xénobiotiques comme le bleu trypan sont inefficaces, d'où la coloration des cellules. On peut donc penser que le bleu trypan peut colorer les cellules en apoptose, en nécrose, perméabilisées (mais pas forcément mortes) et éventuellement en autophagie (si celle-ci évolue vers une mort cellulaire).   [...] Pour le marquage IP, comme tu l'as dit, les cellules en subG1 le sont surtout à cause d'une fuite des fragments d'ADN clivés hors de la cellule. Seulement, le clivage régulier de l'ADN internucléosomal est typique d'un processus apoptotique. Dans le cas des autres morts cellulaires, la dégradation de l'ADN peut intervenir plus tardivement dans le cas d'une mort cellulaire par autophagie et/ou est plus anarchique comme dans le cas d'une nécrose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.   [...] Le RNA later permet d'éviter la dégradation des arn lors de la décongélation. C'est utile si tu dois couper un certain poids pour l'extraction ou disséquer certaines parties et que ça prend un peu de temps sinon il faut couper sur de la carbo. J'ai fait des tests sur la qualité de l'ARN.  [...]

ADN mitochondrial - Page 2

Le vieillissement est un phénomène complexe, ça met bien plus en jeu que la dégradation de l'ADN mt... De plus, si les mitochondries sont moins efficaces, la cellule suractive en compensation et peu les multiplier. On m'a toujours dit que la concentration intracellulaire d'ATP était une constante biologique des plus régulées (par exemple, pendant un effort, elle chute vraiment au dernier moment, au complet épuisement du sportif).  [...] prowazekii genome contains the highest proportion of non-coding DNA (24%) detected so far in a microbial genome. Such non-coding sequences may be degraded remnants of 'neutralized' genes that await elimination from the genome. Phylogenetic analyses indicate that R.   [...]