• Forum - Culture, Glycérol, Stérile

[Microbiologie] Conservation des germes pathogènes

S'il s'agit de bactérie, le mieux c'est de préparer une suspension fraiche (en phase exponentielle), de prendre 1700µl de cette suspension dans un cryotube, ajouter 300µl de glycérol stérile, mélanger et conserver à -80°C sinon à -20°C. tu gratte un peu chaque fois que tu veux lancer une culture, sans laisser dégeler la suspension. à renouveler ta préparation une fois par an.  [...] le lendemain, dans un tube eppendirf stérile tu mets 200µl de la culture bactérienne et 800µl du glycérol stérile à 100% et tu conserves à -20°C ou dans l azote liquide s'il est disponible dans votre laboratoire.  [...]

milieu de conservation -80°C Légionelles

Je pense qu'un milieu classique de conservation de bactéries devrait suffire. Ils sont à base de glycérol, mais je ne connais pas la composition exacte.  [...] On conserve en général les bactéries à -80°C dans leur milieu de culture standart dans lequel on ajoute 20% de glycérol stérile.  [...]

[Microbiologie] Recherche de méthodes fiable pour des conservations de souches bactériennes pure.

Une technique m'avais parus envisageable et très intéressante, c'est celle de la culture en piqure qui se fais en tube et se conserve a 4 degrés, or quel gélose est fais pour quel bactéries Existe t'il d'autre méthodes simple que je puisse mettre en place.  [...] Certaines ont des milieux spéciaux genre avec du sang par exemple. Je ne suis pas spécialiste, je ne cultive que des dérivés de E coli pour faire des clonages ou de la purif de protéines. Mais j'imagine que tout peut se congeler en glycerol.  [...]

[Microbiologie] conservation de souches microbiennes

850 µl de ta culture bactérienne + 150µl de glycérol stérilisé.. En travaillant autour d'une flamme.  [...] Tu as également le gélose-stock où tu congèles une carotte d'une culture sur boîte mais je ne sais pas si c'est une technique de conservation à -20°C.  [...]

[Microbiologie] conservation des cellules souches

Tu les mets dans du milieu de culture avec 20% de glycerol.  [...] Tu les décongeles et en prends un aliquot pour redémarrer une mini culture. Le reste repart à -80°C.  [...]

[Physiologie] phage lambda

si on introduit l opérateur droit du phage lambda dans une bactérie dont le milieu de culture contient du glycérol comme seule source de carbone,la protéine CI est elle synthétisée.  [...] mais si on introduit un plasmide contenant (le répresseur de l'opéron lactose(lac I),l opérateur de l opéron lactose (lac OP)et la répresseur de lambda(CI)) dans une bacterie dont le milieu de culture contient du glycerol comme seule source de carbone.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage

J'essaie en vain de cloner en quantité suffisante un fragment ADN pour mon stage de M2. Le soucis est que lors de mon clonage (préculture et culture), la DO est bonne mais quand on dose la quantité d'ADN plasmidique, elle est très faible et très variable (de 10 à 300 ng/µL).  [...] Mon maitre de stage a entendu parler d'une technique pour mettre en culture sur boite une culture liquide mais il ne sait pas comment.  [...]

[Microbiologie] Changement de couleur de mon milieu de culture après autoclave

J'utilise un milieu de culture King B (à pH. 7.2) contenant des peptones, du glycérol, du MgSo4 7H2O ainsi que du K2HPO4. Le milieu est censé être jaune.  [...] Si tu autoclave tes composés avant de les mélanger et que tu fais ton mix en milieu stérile par la suite, tu obtiens le meme résultat coloré.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qu'est-ce que la cellule subit dans le Formaldéhyde ?

Les effets sur la cellule est normalement non-visible (excepté que tous ces processus sont arrêtés, donc elle meure), et la cellule est normalement bien conservé. Cependant, s'il l'on cherche à visualiser de très petites structures/organisation, la PFA réorganise à l'echelle du nanomètre les protéines en un réseau réticulé.   [...] mort. Dans l'état actuelle des connaissances, ces personnes sont mortes dès qu'elles seront réchauffés. J'espère qu'un jour, on pourra les réveiller sans les tuer, mais... En culture cellulaire, on congèle les cellules avec un protecteur (du type glycerol).  [...]

[Microbiologie] Congélation banque

A -80°C j'utilise 500 µl d'un mix glycérol/eau 50/50 pour 2/3 (1ml) de culture LB concentrée. Le résultat est satisfaisant.  [...] Mais à -150°C je crains que la cryoprotection par ce mix soit insuffissante pour minimiser la perte de viabilité sur le long terme.   [...]