• Forum - Culture, Boîte, Liquide

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage

J'essaie en vain de cloner en quantité suffisante un fragment ADN pour mon stage de M2. Le soucis est que lors de mon clonage (préculture et culture), la DO est bonne mais quand on dose la quantité d'ADN plasmidique, elle est très faible et très variable (de 10 à 300 ng/µL).  [...] Mon maitre de stage a entendu parler d'une technique pour mettre en culture sur boite une culture liquide mais il ne sait pas comment.  [...]

[Biologie Moléculaire] Préculture et culture?

C'est à dire par exemple que tu prendra 2 ml de ta pré-culture que tu mettera dans 98ml de LB+ampi (soit 2ml dans un volume de 100ml final = 2%)...et cela tu le feras deux fois pour avoir 2*100 ml dont un pour induire à l'IPTG et l'autre qui sera non induite à l'IPTG.  [...] Je pense que la première culture (pré-culture) sert à remettre en forme les bactéries... si tu pars de bactéries de milieu liquide ou d'une boîte de pétri qui sont restées à 4°C par exemple, tu peux avoir des bactéries mortes ect.  [...]

[Génétique] Production d'interleukine 2

Puis tu fais une culture sur boite de petri avec une sélection par un antibiotique correspondant à ton plasmide. De la tu repiques une colonie et tu fait une culture liquide à partir de cette dernière. A cette étape il est important de valider ta construction par un séquençage et une PCR, après avoir extrait une petite quantité de ton plasmide (ex.5ml de culture extrait par mini prep).  [...] Ensuite, à partir d'une bonne culture (plusieurs fois 100ml par exemple), tu pourras récupérer ton surnageant, le concentrer de nouveau et le purifier selon la méthode la plus appropriée en fonction de ton tag.  [...]

Densité bactérienne

Le nombre d'UFC correspond au nombre de cellules vivantes, il se calcule en étalant des dilutions d'une culture et en comptant le nombre de colonies sur chaque boite (1 colonie est issue d'1 cellule vivante de la culture liquide) et en faisant des moyennes.  [...] La densité optique, mesurée au spectrophotomètre, quantifie le nombre de bactérie dans la culture mais certaines cellules mortes sont comptées aussi.  [...]

[Microbiologie] Repiquage sur milieu YPD de S. cerevisae

Si tu pars d'une suspension liquide, il te faut au moins DO600nm=1 tu prend une anse de platine que tu trempes dedans et tu stries sur une boite YPD. Si c'est juste pour la diluer, tu prends 5 microlitres de ta culture que tu dilues dans 5ml et hop.  [...] Salut, déja merci de me répondre...Et bien je pars d'une culture sur boite (milieu YPD)... Et je ne possède pas de spectropphotomètre. Dois-je faire une supsension Quel est le mode d'ensemencement pourun repiquage Pour l'incubation je ne peux pas faire autrement il n' y pas d'étuve.  [...]

dosage des protéines

j'ai penser aux méthodes de dosage par l'ONP mais concretement je ne sais pas si je dois prélever les bactéries de la boite de petri (colonies) et réaliser le dosage directement.  [...] a partir des colonies sur la boite de petri tu en prends une que tu mets dans un milieu de culture liquide (5ml) tu mets le tout a agiter la nuit a 37°C.  [...]

[Microbiologie] Les différents systèmes de comptage de colonies en boîte de Petri

Compter les colonies sur une boite revient à compter le nombre de cellules vivantes de la culture liquide que l'on y a étalé.  [...] Parfois on compte les colonies à l'oeil nu, d'autres fois on dilue la culture avant d'étaler pour éviter d'avoir des tapis ou un trop grand nombre de cellules (genre 10'000 colonies par boite), en procédant par dilutions en série d'un facteur 10 à 10^-10 maximum je pense.  [...]

[Biologie Moléculaire] Passer d'une miniprep à une maxiprep

PS. Pour conserver des bactéries qui sont dans du LB et éviter toute contamination, il est conseillé de précipiter puis de resuspendre dans du glycérol (30 à 50%). Si tu laisses tes cultures liquides à température ambiante dans le labo, elles vont pas faire long feu.  [...] si tu as encore de la miniculture que tu as utilisé pour faire la miniprep (celle qui est positive), et qu'elle a été bien conservée, tu peux en étaler un peu sur une boite et mettre le reste dans une culture liquide.  [...]

[Microbiologie] Lecture du résultat d'une culture en boîte de Pétri

Je souhaiterais savoir s'il est possible d'identifier le résultat d'un culture en boîte de Pétri à l'oeil nu (si les éléments se reconnaissent facilement, ou en se basant sur un référentiel imagé).  [...] Pour le spot jaune que tu as (deuxième photo), je pencherais pour une actinomycètes, certaines font des structures de ce genre. Si tu te renseignes un peu dessus, ça fait des formes parfois très jolies sur boite de pétri.  [...]

[Microbiologie] Incubation des Geobacillus

Le récipient avec de l'eau dedans, cela me semble être le minimum requis pour tout type de culture. Pour des milieux liquides en boite de petri diamètre 100 mm dans un incubateur à 37°C sec, c'est plus d'un mL qui s'évapore par jour.  [...] La gélose plus épaisse me parait être une bonne idée. Je pense même que tu peux préparer ta gélose légèrement moins concentrée car l'évaporation la concentrera et si ta culture dure trop, la pression osmotique risque d'être trop forte.  [...]