• Forum - Courbe, Quantité, ADN, Cellules

[Biologie Cellulaire] la cytometrie en flux

voila jetudie en ce moment le cycle cellulaire. jai compris le principe de la cytometrie en flux mais je ne comprends pas comment lire les resultats de la courbe obtenue. il me semble que le cytometrie en flux permet de quantifier l'ADN ds les cellules mais je ne vois pas pourquoi le pic de G1 est plus haut que celui de G2 alors qu'en G2 l'adn est repliqué (puisque G2 suit la phase S et qu'en G2 il y a donc le double d'adn ).  [...] Pour l'étude du cycle cellulaire en cytométrie de flux, la courbe représente la quantité d'ADN en abscisse et le nombre de cellules en ordonnée. Il y a toujours plus de cellule en G1 qu'en G2 donc le pic est plus élevé mais comme la quantité d'ADN est double en G2 qu'en G1, le pic G2 est plus à droite que le pic G2.  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn

Je me suis inscrite dans ce forum pour une raison particulière. En effet, je suis en seconde au lycée et notre professeur de SVT nous a demander de tracer dans un exercice une courbe concernant l'évolution de la quantité d'ADN au cours du cycle cellulaire.  [...] Eh bien pour la courbe, en fait quand elle monte je suppose que c'est grace à la multiplication cellulaire ( ou mitose), quand elle descend c'est la division celuulaire mais quand elle est stagneé, c'est-à-dire q'elle ne monte plus et ne descend plus( elle est l'horizontale ) je suppose que c'est la dupllication mais là vraiment je suis pas sûr de moi car je ne sais pas exactement à quoi cela signifie.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

Ensuite, courbe d'amplification. votre signal décolle a partir d'un certain cycle, jusqu'a atteindre un plateau (pas important). Le moment ou le signal de chaque échantillon décolle, le Ct, est directement lié à la quantité d'ADN initiale. C'est d'ailleurs ce qui permet de le quantifier.  [...] Enfin, courbe étalon. Elle permet de corréler la valeur du Ct que détecte la machine avec la quantité réelle d'ADN présente dans le tube au début du run. En théorie et comme vous le savez, la quantité d'ADN dans une PCR double à chaque cycle. En théorie oui mais ce n'est pas toujours vrai, et cela dépend de nombreux paramètres (qualité des amorces, quantité initiale, mix, paramètres de cycle, etc.  [...]

Gène de ménage (gène de référence...)

Ce que tu vas donc faire c'est faire une qPCR pour quantifier le TGFB et un gène de ménage (ex. GAPDH) dans chaque échantillon. Ensuite tu vas faire le delta CT entre la Ct du TGFB et celle de la GAPDH. Etant donné que tu as la même quantité totale d'ARN dans tes échantillons la Ct de la GAPDH ne devrait pas beaucoup changer (puisque c'est ton gène de référence) par contre celle du TGFB oui.  [...] je crois qu'il y a des spécialistes de la qPCR sur le forum, donc, à voir pour plus de précision. Sur le principe, quand tu fais une (RT-)PCR, tu sais que la quantité d'ADN augmente avec le nombre de cycles, suivant une courbe en S, avec une phase exponentielle au milieu.  [...]

SYBR green et BET (ou la non compréhension de la PCR en temps réel)

Dans la PCR classique, le BET n'est ajouté que lors du gel (directement dans le gel ou via un bain contenant du BET), il s'intercale dans les molecules d'ADN et fluoresce sous UV. Il permet une semi quantification car en général on revele en fin de reaction donc il s'agit d'une quantité finale.  [...] Dans la qPCR, le sybrgreen (ou autre molecules fluorescente selon la méthode) est ajouté directement dans le milieu. dans le cas du Sybrgreen il ne fluoresce que dans l'ADN double brin. Le thermocycleur va donc prendre une mesure de cette fluorescence à la fin de chaque cycle, grace a une courbe d'étaloonage on pourra quantifier la quantité d4ADN initialement présente.  [...]

[Biologie Cellulaire] Internalisation et trypsine

une cellule est positive quand elle a internalisé une molécule fluorescente, donc il y a eu endocytose. et parmi les cellules qui ont endocyté, on regarde la quantité de molécules florescentes internalisées.  [...] (puisque 100% des cellules sont marquées). Le seul point intéressant est la variation de l'intensité du marquage (la quantité de peptide fluo attaché à la cellule).  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

En stage j'ai fait de la qPCR, et j'ai pu remarquer que j'avais une courbe de MELT très moche. On m'a expliqué que cela signifiait que j'avais une amplification non spécifique. Est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer comment elle est réalisée.  [...] La courbe de fusion représente la décroissance de fluorescence de l'agent intercalant donc la quantité d'ADN double brin en fonction de la température que l'on fait augmenter (l'ADN double brin se dénature de plus en plus).  [...]

[Biologie Moléculaire] C'est quoi le COT ?

Note. Les points de la courbe représentent la concentration en ADN double brin en fonction du produit de la concentration totale en ADN (Co) par le temps d'incubation (t) dans des conditions déterminées.  [...] C 0.t, c'est le produit de la concentration C 0 de l'ADN et du temps t d'incubation. Ce n'est donc pas la courbe, mais ce qui est en abscisse sur le graphique.  [...]

ELISA courbe d'etalonnage

DAns le cas d'un dosage il te faut faire une gamme, tu pourras doser mais avec une certaine marge d'erreur dépendant de ta valeur car la courbe d'étalonnage n'est asp une droite, si on a une quantité proche de la quantité poiyr laquelle la courde d'étalonnage a une forte pente ce sera très précis, dans le cas inverse la précision sera très faible.  [...] Nous avons fait une courbe étalon avec des IgG std, de concentration connue. Une fois cette courbe obtenue, nous cherchons la quantité d'IgG présents dans un la solution mère (hybridôme). Nous avons plusieurs dilutions de cet hybridöme. Par rapport à la courbe étalon, avec la DO de l'hybridome, rapportée à celle de l'IgG std, je dois trouver la concentration de l'hybridome.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel (qPCR)

Je vous remercie d'abord pour vos réponses, cependant, j'aimerais bien signaler que la courbe de fluorescence est exponentielle, donc la quantité d'ADNc augmente via une equation expionentielle, jusqu'à ce que les sites d'action des polymérase soient tous saturés, on passe alors à la partie linéaire de la courbe.  [...] De plus on ne calcule pas l'augmentation de la quantité d'ADN dans le tube, on calcules le nombre de cycles théoriques qu'il faut pour avoir X quantité d'ADN, qui équivaut à une quantité Z d'ADN initiale, ce qui est légèrement différent.  [...]