• Forum - Couples, Molécule, Rapporteur

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage

L'immunomarquage cellulaire permet de détecter un antigène spécifique (d'origine cellulaire ou microbienne) et éventuellement d'en préciser la localisation subcellulaire au moyen d'anticorps. Ces anticorps primaires peuvent être directement couplés à une molécule rapporteur (iode radioactif, fluorochrome, enzyme ou particules d'or).  [...] Alternativement, ils peuvent être détectés à l'aide d'anticorps secondaires marqués. Ces techniques peuvent être rendues plus sensibles par l'ajout d'étapes supplémentaires d'amplification.   [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Je suis en train de travailler ma biologie moléculaire pour la fac, et j'en suis aux gènes rapporteurs, et ceux-ci me posent problème. J'espère que vous pourrez m'éclairer.  [...] Pour les constructions, oui votre explication peut être une des raisons à ma connaissance. En fait, insérer un gène rapporteur à la place du gène permettra d'étudier surtout son mode d'expression. qu'est ce qui active sa transcription et / ou sa traduction, qu'est ce qui la régule etc.  [...]

[Biochimie] recombineering...

effectivement, car l'ARN est transcrit, puis épissé (c'est a dire que des morceaux sont enlevé) et pour finir, il reste dans la cellule... donc il faut faire attention ou on place le gène rapporteur, pour éviter de le perdre.  [...] je ne connais pas la proportions d'ARN qui n'ont pas ces structures, mais je pense que je vais partir du principe que mon ARN les contient, et je vais juste mettre une séquence kozak bien placée avant le rapporteur peut être, mais des gars de mon labo me disent que c'est pas la peine, car parfois ça fonctionne sans.  [...]

recherche d'un kit de détection de l'hydroquinone

Rebonjour, je voulais savoir si les ppar se couplent a l'hydroquinone pour ensuite utiliser ce recepteur nucleaire pour transcrire un gene rapporteur dans des cellules immortalisees humaines.  [...] Cependant comme l'hydroquinone est un dérivé phénolique pourrait on utiliser la technique de capteurs biologiques aux phenols la détection serait elle rapide.   [...]

mesure de l'expression d'un gene

Si tu utilises un systeme rapporteur comme je le suggerait dans mon premier message, tu n'as plus les problemes de stabilite qui intervienne, puisque c'ets un parametre commun avec tes témoins.  [...] Je ne peux pas utiliser de système rapporteur, car je veux étudier un couple d'ARN sens et antisens dont les sequences se chevauchent. Ce n'est pas la force des promoteurs qui m'intéresse, mais la transcription de l'un par rappport a l'autre, et peut etre l'effet de l'anti-sens sur le sens.  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Mais a mon avis, le principal avantage de l'in situ est que l'on detecte directement l'ARN present a un moment donne alors qu'avec le gene rapporteur, on s'eloigne un peu de la situation normale puisque l'on a du introduire une construction dans l'organisme (il y a eu des problemes, cf Taylor C.B. (1997) Promoter fusion analysis. an.  [...] Ca depend comment est realisee la fusion, il est possible de faire une fusion traductionnelle du gene rapporteur avec la proteine d'interet afin de detecter la localisation de celle ci. Dans ce cas, il est recommande de transformer une telle construction dans un mutant pour le gene d'interet afin de voir si la proteine de fuision complemente le phenotype (un tres bon controle).  [...]

[Génétique] Mutagenèse

Si j'ai à identifier les bases importantes d'un promoteur qui est déjà dans un vecteur-sonde. (il y a 1000 bases).   [...] Il faut avancé petit à petit. Un bon moyen est de commencé par caractérisé des régions importantes au niveau de ton promoteur. Pour cela tu peux réalisé des délétions de régions de plus en plus importante de ton promoteur et regarder l'impact sur la fonctionnement de ce promoteur en le couplant à un gène rapporteur par exemple.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western et révélation bandes

Mon problème est d'un part la révélation, en effet on révèle par chémoluminescence car le gène de la ferroportine est couplé à la GFP (gène rapporteur et fluorescent naturel). Ce qui me pose pb c'est que l'on utilise un kit ECL après action d'un Anticorps II radioactif anti GFP alors qu'on pourrait détecter directement la GFP via excitation et émission (car il émet une lumière verte).  [...] Avez vous utilisez ce marqueur de taille Connaissez vous le poids moléculaire de la ferroportine, car ça m'aiderait à la localiser sur le gel qui est très très moche.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Je vous remercie d'avance pour vos réponses et je vous souhaite une bonne soirée d'haloween (la mienne sera sous le signe de la biologie moléculaire.).  [...] En générale YFG est couplé à un gène rapporteur (qui permet la sélection des plasmides qui intègrent effectivement YFG). C'est souvent un gène de résistance chez les bactéries. Ainsi lorsqu'on place les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu avec antibiotique, ce sont celles qui survivent qui on intégré YFG étant couplé audit gène de résistance à l'antibio.  [...]

système de double hybride

Vu que l'on est très sérieuc au laboratoire, on effectue une série de contrôle en même temps que le test principal. Ces contrôles ont pour objectif de vérifier que notre gène rapporteur ne s'exprime que lorsqu'il y a interaction entre les deux activateurs de GAL4.  [...] Pour le contrôle positif, on fait comme dans le cas A, c'est à dire les protéines natives de la levure, afin de vérifier que tout fonctionne bien. Puis deux contrôle négative, B et C, qui permette de vérifier si la fusion PCR-1-GAL4BD et AST-1-GAL4AD sont incapable d'activer le gène rapporteur lorsqu'ils sont seuls.  [...]