• Forum - Coupe, Enzymes, Restriction

plasmide-clonage

aprés avoir rendu les bactéries compétantes et les avoir coupé avec des enzymes de restriction, on peut faire rentrer la molécule d'adn dans les bactéries, ensuite il faut repérer les bactéries ayant reçu ce géne.  [...] En général (hors système Bleu-blanc de la B-Gal), on extrait l'ADN des colonies ayant poussé (miniprep. on pique une colonie, on la fait pousser en culture une nuit dans un milieu liquide contenant l'antibiotique en question, puis on la casse et on purifie son ADN) et on coupe l'ADN avec des enzymes de restriction pour déterminer quelle colonie possède le fragment d'intérêt (on dit alors que la colonie est un clone positif ) et l'ADN de cette colonie est alors amplifié par Midipreps pour être utilisé.  [...]

principe de transformation des levures?

pour ceux qui est du plasmide l'introduction du géne se fait a l'aide d'enzymes de restriction spécifique qui coupe ton plasmide au niveau des séquence souhaiter et tu peux ainsi introduir ton géne.  [...] Etape importante on utilise des sphéroblastes. c'est-à-dire des levures dépourvues de paroi (tout l'assemblage de sucres et de protéines au-delà de la membrane plasmique), on les obtient par réaction enzymatique (pectinases je ne sais plus).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Je me permets de vous écrire car j'ai un TP de cancérologie ou nous devons réaliser une carte de restriction d'un plasmide inconnu et on doit se débrouiller. On a a notre disposition les enzymes. et II, BamH1, BglII, Eco RI, Eco RV, Hind III, Pst I, Pvu II, Sac I, Sma I, Stu I, Sba I et Xho I.  [...] Ceci devrait te permettre de réduire le choix de tes enzymes et le nombre de puits. Après, faut éviter de choisir des enzymes dont le site de restriction est trop semblable. J'entends par là qu'il y a des enzymes qui reconnaissent le même site palindromique, mais ne le coupe pas de la même façon.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Dis, pourquoi on coupe avec ces enzymes de restriction précisément est-ce que tu as sous les yeux la carte génétique du plasmide avec son MCS.  [...] Sinon, si tu veux orienter l'insert, tu coupes par deux enzymes de restriction. En tout cas, c'est ce qu'on nous a appris à l'école.  [...]

[Génétique] adn et police scientifique TPE help svp !

3) Donc je pense peut-être qu'on coupe cette séquence de PCR (qui me parait pourtant déjà bien réduite) avec des enzymes de restriction pour ensuite pouvoir procéder à l'electrophorèse. Mais je sais qu'en criminalistique, on ne se sert que des introns (séquence non codante), (pour raisons éthiques) or je croyais que les enzymes de restriction étaient spécifiques aux gênes (or gêne absent sur les séquences non codantes) donc là aussi je bloque.  [...] 3) les enzymes de restriction ne sont pas spécifiques aux gènes mais à des séquences, si la séquence se trouve dans un intron, elle va couper quand même.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueurs dominants et codominants

Prenons un exemple simple, une enzyme de restriction qui coupe au site de restriction A.  [...] l'enzyme de restriction coupe au niveu du site de restriction et doit générer 2 fragments de restrictions pour le homozygotes et les hétérozygotes.  [...]

PCR et clonage

on veut cloner une séquence dans un plasmide (pGEM3) coupé par 2 enzymes de restriction (enzymes utilisés pour linéariser pGEM3).mais aucun des sites qui entourent la séquence à cloner n'existe dans le site de clonage de PGEM3.  [...] 1- soit tu mets des sites de clonages en 5' dans tes oligos qui vont te permettre d'amplifier le fragment par PCR. Ensuite tu digeres le produit de PCR avec ces enzymes et tu le ligue dans ton vecteur coupé par les enzymes compatibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Je dispose de deux enzymes de restrictions, une XhoI qui possède deux site de restriction dans la cassette de polyclonage. l'autre enzyme est MluI cependant sur le schema du plasmide je n'ai pas son site de restriction donc je ne sais pas ou elle coupe.  [...] oui tu peux, sous certaines conditions. Il faut un site de restriction dans le vecteur, et un autre dans l'insert (pas au milieu de l'insert). Selon que l'insert est dans un sens ou dans l'autre, tu auras deux fragments différents en taille. Pour l'histoire du plasmide natif j'aurais dit que c'etait le vecteur seul.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Et pareil pour les enzymes de restriction, du fait quelles sectionnent l'ADN en des lieux spécifiques ont sait lesquels seront coupés.  [...] Généralement, lorsque l'on utilise une enzyme de restriction commune, on ne parle pas d'où elle coupe (car elle peut aussi des fois ce tromper) mais à quelle fréquences elle coupe en moyenne. Tout les 200pb Ou toute les 4000pb C'est surtout ceci qui est regardé.  [...]

Plasmide recombinant

Ton plasmide a été coupé par deux enzymes de restriction différentes, on ligue ensuite un insert. S'il s'agit d'une rétrotranscription d'un ARNm, on parle d'ADN complémentaire et pas d'ADN copie. Pour la compréhension de ton exercice, je pense qu'on s'en fiche de savoir d'où vient cet ADN à liguer.  [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]