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[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment!!!

je digère un vecteur d'environ 6000pb avec une enzyme de restriction qui coupe une seule fois dans ce vecteur. je vérifie ma digestion sur gel d'agarose...une belle bande à 6000pb. je décide de précipiter (avec de l'éthanol) l'ADN sur la nuit. le lendemain, je re-dépose sur gel.  [...] encore plus étrange, je coupe ma bande de 2000pb je la rentre dans un vecteur pGEM-T et je fais des PCR avec les amorces T7 et SP6 qui encadrent le site de clonage. et là j'ai des bandes à 1000pb.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

dans le principe c'est bon, mais ensuite il faut que tu connaisses les cartes de restriction des vecteurs pour voir le sites disponibles et déterminer si tu peux faire un clonage orienté et cohésif de ton gene. Il faut aussi que tu sois plus précis, par exemple pour les bactéries, il faut que tu sois capable de déterminer si les bactéries ont intégré la construction, tu vois de quoi je parle.  [...] - Enfin on te demande de vérifier ta construction PCDNA3-GFP une fois que tu l'auras obtenue, c'est-à-dire que tu dois trouver une ou plusieurs enzymes de restriction qui te donneront un résultat différent en fonction de si tu as ton insert ou non. Par ex le choix d'une enzyme pour laquelle tu as 1 site dans ton vecteur PCDNA et un site supplémentaire dans ton insert est idéal car tu auras 1 bande = ton vecteur linéarisé si ton vecteur ne contient pas l'insert, et 2 bandes avec des poids moléculaires bien précis si tu as bien ton insert.  [...]

sonde et enzyme de restriction

Bonjour tout le monde, j'ai une petite question en génétique, alors si j'ai une sonde qui va s'hybrider avec un fragement d'adn, et il y a une enzyme de restriction qui va couper au beau milieu du fragment, du coup la partie qui était supposée s'hybrider avec la sonde, devient coupée en deux, est ce que la sonde, va s'hybrider avec une des deux petits bouts crées autrement dit si je fais une éléctrophorese j'aurai une seule bande ou bien 2.  [...] ca dépend ou s'hybride la sonde, précisément. Si la sonde recouvre tout le fragment et que le site de restriction le coupe en deux, il y a des chances pour que la sonde s'hybride avec chacun des deux fragments. En electrophorèse, vous aurez deux bandes si les deux fragments sont de taille différentes, sinon il n'y aura qu'une bande (mais deux fragments quand même).  [...]

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

Pourquoi Visiblement, ton plasmide ne possède qu'un seul site BamHI puisque tu obtiens une seule bande. (Ou n'en possède pas du tout. on ne va pas trop envisager ça étant donné le manque de contrôles...).  [...] Oui je suis d'accor il n'y a qu'un seul site bamHI car 1 seul bande mais j'ai auusi 2 site ecoRI car jobtien de bandes après digestion. Ce que je ne compren pas c'est que je n'obtien qu'une bande lors de la double digestion, est-il possible alor que lors de cette double digestion les enzymes bamHI et ecoRI aient coupé au même endroit.  [...]

[Biochimie] RFLP et application !

On distingue les allèles parce que leur séquences sont différente si bien qu'en coupant avec une enzyme qui coupe à certains sites on a toutes les chances d'avoir un nombre variable de coupures, ce qui génèrent des bandes de tailles différentes. Donc hétérozygotes.  [...] - Si elle coupe, là y a probléme, quand on a 2 bandes, je me suis dite que peut être ça représente les fragments issus justement de la coupure. mais quand l'enzyme coupe et on a une bande hétérozygote.. comment c'est possible.  [...]

[Identification] Identifications d'oiseaux !

Félicitations, tes oiseaux sont vraiment variés et jolis. Puis-je te demander dans quel coin de France tu habites Même si aucun oiseau ne semble spécifique d'une région, tu dois être au calme loin des grandes villes, non Chez moi en banlieue parisienne la maison à graines pour les oiseaux a attiré quelques mésanges et pinsons les tout premiers jours puis des hordes de moineaux belliqueux se sont appropriés le coin et ont systématiquement chassé tous les autres.   [...] Je suis à Lyon et à la fac sur le site de la Doua je vois régulièrement un couple de colombes, je présume. De couleur cendrée, plus gros que des pigeons, mais avec une tête plutôt fine, elles possèdent un col blanc et une bande blanche sur les ailes, visible seulement lorsque celles-ci sont dépliées.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Ce que je dis te parait peut-être banal, mais crois-moi tout le monde ne le comprends pas et il est très important que tu ne fasses pas croire au lecteur de ton compte-rendu que tu ne sais pas du tout ce que tu fais en évitant des formulations maladroites et peu précises.   [...] Ce que tu appelles deuxième site de coupure, c'est donc probablement une deuxième bande, qui a une taille située entre 800 et 1000pb.  [...]

[Génétique] Retard sur gel

mais l'on voie 2 bandes car. la plus petite bande il n'y a qu'un site fixé par la protéine, la plus grande bande car il ya les 2 protéines fixés.  [...] Donc en gros si tu as un systeme purifie ADN + proteine pure, tu as une bande si aucune fixation (ou fixation hyper forte et tout l'ADN est retarde), une ou deux bandes si tu as au moins un site de fixation de ta proteine. Attention, tu peux avoir plusieurs sites de fixations et seulement 2 bandes voire une seule (par exemple si l'affinite est si grande que tu ne peux voir les etats intermediaires).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Pour cribler les clones qui sont dans le bons sens, je prendrai en sus une amorce dans le vecteur (en aval). 2 bandes = insert dans le bon sens, 1 bande= insert dans le mauvais sens, pas de bande pas d'insert.  [...] Le top pour la digestion (selon protocole promega/ NE Biolabs, teste et approuve par tout le labo) C'est 50 uL volume final (ADN purifie, pas tout juste sorti de PCR), et max 2 uL d'enzyme. Un volume plus petit ca coupe mal, et plus d'enzyme au mieux ca change rien, au pire ca coupe mal ou avec activite star.  [...]

[Génétique] formule chromosomique

une inversion a lieu quand un chromosome est coupé en deux endroits et que le segment intérieur se recolle à l'envers. Ici tu as une inversion sur l'un des chromosomes de la 9ème paire, péricentrique c'est-à-dire incluant le centromère, et entre la bande 12 du bras court et la bande 13 du bras long.  [...] En fait je me mets à la place du collègue généticien qui va inévitablement être consulté pour donner le conseil génétique, ce qui n'est jamais simple de base, alors lorsque les patients arrivent avec des notions glanées sur les différents forums, au gré de témoignages plus ou moins bien renseignés et d'infos dont la validité est le plus souvent très douteuse...ça devient quasiment mission impossible.   [...]