• Forum - Copies, Plasmide, Contenu, Volume, Bactéries

[Biochimie] plasmides

Bjr tt le monde.En fait j'ai un petit souci et j'ai besoin d'aide.j'aimerai savent calculer le nombre de copies de plasmide contenu dans une bactérie connaisant le volume et le nombre de bactéries qu'on a au départ ainsi que le volume et le nombre de paire de bases du plpurifié à la finmerci.  [...] - la vitesse de croissance de tes bactéries, et donc combien tu en as au final.  [...]

[Biologie Moléculaire] urgent besoin d'aide!!!

Vous disposerez au départ de 3 mL de culture bactérienne ayant poussé toute la nuit, cela représente 3x10^9 bactéries. En admettant qu'après le TP, vous ayez purifié 1 microgramme d'un plasmide de 3000 paires de bases. Calculez le nombre de copies de plasmide contenu dans une bactérie.  [...] Maintenant je vous indique quand même qu'un de vos collègue de promo (probablement) nous a déjà posé exactement la même question et une réponse lui avait été donnée. La discussion n'est pas si vielle, vous devriez pouvoir la retrouver.   [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de ligase?

1/ Calcule to efficacité de transformation, si elle est en dessous de 10^6 colonies /ug de pUC18 (ou un plasmide de petite taille équivalent), jette tes bactéries et reprépares-en d'autres (ou achètes-en d'autres). Je vois trop d'étudiants me dire j'ai transformé 1ug de plasmide et j'ai un tapis, donc mes bactos sont OK.  [...] Des bactéries à 10^4 colonies/ug donneraient aussi un tapis avec 1ug de plasmide, pourtant elles seraient impropre à la plupart des constructions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

edit. vu la différence de quantité d'ARN, as tu fait un gel d'ARN pour vérifier l'intégrité des ARN dans l'échantillon le moins concentré Y a t il un traitement à la DNase pour t'assurer que tu n'amplifies pas le génomique qui aurait pu cntaminer l'échantillon le plus concentré D'ailleurs les amorces chevauchent elles des jonctions exon/exon, pour éviter d'amplifier l'ADN As tu un controle sans RT (donc pour lequel il n'y a pas de cDNA et qui théoriquement ne doit rien donner en qPCR ).   [...] IngDr a raison, tu peux vérifier tout ça avec un gène de ménage. Tu peux même le cloner dans un plasmide et ainsi déterminer un nombre de copies d'ADN par volume. Tu réalises ensuite une gamme et ainsi tu pourras poser des valeurs sur l'expression de ton gène grâce à la Q-PCR et ton gène de ménage.  [...]

PCR et vecteur de clonage

Une colonie bactérienne sur gélose correspond à peu près à 10 9 bactéries en 24h. Selon les cas tu peux avoir une ou plusieurs copies du plasmide par bactérie.  [...] La bactérie pour se multiplier va répliquer son génome et le plasmide contenant le gène A. Au final tu obtients donc un plasmide d'expression, en grande quantité, et contenant le gène d'intérêt. Tu peux également récupérer la protéine A (synthètisée par la bactérie car codée par le gène A) dans ton milieu de culture.  [...]

Préparation d'ADN plasmidique

Calculer le volume V qui a été utilisé au début de l'expérience pour préparer une quantité totale de 10ug d'ADN plasmidique dans 1mL.  [...] 1unité de DO=10^9bactéries. l'ADN est plasmidique. temps de regénération de la culture =37min. taille plasmide=2,7kb. taille d'une bactérie=1*0,4um². nombre de copies du plasmide dans la bactérie=500. nombre avogadro=6.10^23.poids moléculaire d'un nucléotide=330.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantité totale de plasmide

Dans un premier temps, vous devez réaliser l'extraction des plasmides à partir de culture de bactéries. Pour chaque culture (A ou Amut), vous disposez de 12 ml contenant 3 × 10 puissance neuf bactéries par ml.  [...] Chaque bactérie contient 50 copies d'ADN de plasmide d'une taille De 3500 paires de bases ( même taille pour A et Amut). Le rendement de l'extraction est de 75 %.  [...]

[Biologie Cellulaire] transposons, qui permettent la résistance bactérienne

Voilà, on dit que les transposons permettent la résistance bactérienne (encore plus que les plasmides). Or, un plasmide porte également des gènes de résistance. Par conjugaison, la bactérie est capable de le transmettre à une autre bactérie, tout en gardant plusieurs copies.  [...] Donc, la résistance se propage. De plus, lors des divisions cellulaires, le plasmide est également copié. Alors quel est l'intérêt d'un transposon Pourquoi dit-on qu'un transposon favorise la résistance bactérienne (étant donné qu'il a les mêmes atouts qu'un plasmide) Qu'est-ce que son déplacement entre le plasmide et le chromosome permet, d'autant que cela peut entraîner des mutations.  [...]