• Forum - Contrôle, Positif, Marquage

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage VEGF chez le porc

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage VEGF chez le porc.  [...] je souhaite étudier l'angiogénèse dans un modèle chez le porc. Je voudrais réaliser des colorations par immunohistochimie avec un anticorps anti-VEGF. Pour valider mon marquage, quel tissu ou modèle pourrais-je utiliser pour avoir un contrôle positif de ce marquage.  [...]

[Biotechnologie] bruit de fond et cytométrie

Dans ce cas, c'est pas un problème de spécificité mais seulement d'excès (encore une fois ce problème se pose surtout dans le cas d'un marquage de faible intensité).  [...] Juste pour info, quand tu fais un marquage en cytométrie, il faut toujours faire un contrôle négatif. Ce contrôle mesure le bruit de fond (fixation non spécifique, excès d'Ac, ect). C'est par rapport à ce contrôle que tu peux dire si un marquage est positif ou non.  [...]

[Biologie Cellulaire] Induction d'apoptose 3T3

Si tu cherches pas un controle où les cellules sont spécifiquement apoptotiques et que tu veux juste un signal positif pour tes marqueurs de mort cellulaire (par ex si tu fais un marquage classique annexin V/PI) tu peux aussi congeler/décongeler un aliquot de cellules ca te fera des cellules nécrotiques.  [...] - je souhaite effectuer une manip de détection Annexine V / PI par cytométrie en flux. Je cherche donc à avoir un contrôle positif pour chacun de ces paramètres. Si j'ai bien compris, il me suffit d'avoir des cellules nécrotiques, ce que je cherche donc à obtenir.  [...]

[Immunologie] Lire une courbe de cytométrie de flux

Concernant les axes, dans ce cas, sur l'axe des ordonnées tu as une valeur relative à la quantité d'évènements positifs, autrement dit, plus c'est haut, plus il y a d'évènements. Sur l'axe des abscisses, tu as une valeur relative à l'intensité de fluorescence, donc plus tu te déplaces vers la droite, plus le marquage est intense.  [...] Ceci permet de clairement affirmer que le marquage est positif pour les deux CD en présence de CpG-2006 (on voit bien le déplacement vers la droite de l'histogramme grisé par rapport au contrôle).  [...]

[Biologie Cellulaire] Fluorescence en tissus fixés

J'utilise un vecteur adénoviral pour exprimer une protéine dans le foie de souriceaux. Ce vecteur permet aussi l'expression de la GFP. Comme je fais des coupes pour l'histo, je me demandais si je ne pouvais pas en profiter pour vérifier la topographie de l'infection en regardant la fluorescence de la GFP.   [...] 4/Pas de marquage complémentaire comme control positif, lamelles juste déparaffinéisées et montées dans du moviol.  [...]

[Biologie Moléculaire] probleme de signal southern

J'ai essayé plusieurs choses, augmenter les concentrations, changer tout mes tampons, changer la sonde a marquer, changer le kit de marquage, utiliser une sonde purifiée par HPLC.  [...] As tu un controle positif qui marche Une autre sonde a une position completement differente Si tu as tout change et que tu fais tout correctement, c'est que le marquage n'est pas en cause. Le southern est quelque chose d'assez complexe a faire avec pas mal d'etapes. Il y a peut etre une etape qui est mauvaise.  [...]

[Divers] Analyse statistique de données des puces ADN

Tu as bien entendu le droit de poser des questions, mais même les spécialistes des puces à ADN (ce que je ne suis pas) ne pourront t'aider efficacement que si la question est suffisamment précise. Par exemple pour analyser mes résultats on m'a conseillé le test de Smith et Wesson or je ne comprends pas le fait que bla bla bla a plus de chances de t'apporter une réponse ciblée et efficace que Comment analyser des données de puce à ADN, qui risque simplement de t'apporter la réponse Tu devrais utiliser le test de Smith et Sesson.   [...] Je travaille sur des données issues de puces ADN nylon (marquage radioactif). J'ai 7 puces dont 4 controle et 3 marquées positivement à la maladie d'Epstein Barr (EBV). Et je cherche quels sont les genes différentiellement exprimés entre ces deux conditions.  [...]

[Immunologie] [Cyto"gramme"] abs & ordonnée?

En fait quand je dis positif ou négatif c'est un abus de langage, car souvent la cyto on l'utilise pour reperer certains recepteurs sur les cellules comme par exemple les lymphocytes CD4 ou CD8, donc une cellule CD4 positif (CD4+) voudra dire qu'elle possede le recepteur CD4.  [...] Dans ton cas pour l'ADN oublie ce que j'ai dis (positif/négatif) mais pense plutot en terme de présence ou non du marqueur qui permet de discriminer tes cellules.  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

Donc je dois faire d'autres homogénats à partir de tissu congelé à -20°C, car ceux avec le SDS me serviront à autre chose (je voulais savoir si ça pouvait faire double-emploi.)... Aurais-tu une idée de protocole d'IPP pour étudier l'interaction entre 2 protéines membranaires En effet, je trouve pas mal de choses pour des cultures de cellules, mais à pas à partir de tissu animal.   [...] Ok donc tu penses que je ne peux rien tirer de concluant sur ces manips J'avais pourtant fait un test en WB en utilisant en contrôle histone pour les nucléaires et actine pour les cytoplsmiques, bilan. la fraction cytoplasmique est bien pure (marquage actine seulement), mais pas la nucléaire (marquage histone + actine), ça arrive souvent.  [...]

[Identification] Immunohistochimie

+ = signal positif. tu détectes ta cible donc elle est sur le tissu et tu peux voir ou exactement (attention au marquage diffu qui peu traduire la non spécificité de l'Ac).  [...] Mais y'a encore quelque chose qui m'échappe, quand on fait une IHC c'est avec des anticorps dirigés contre des antigènes, dans ces cas là quand on fait par exemple une IHC anti-insuline (donc lui c'est anticorps si j'ai bien compris), dans le pancréas et qu'on a une réponse positifs, comment ça se fait que ça soit positif puisque dans la cellule on a des gènes de l'insuline et pas des anti-gènes (qui sont normalement mauvais non ).  [...]