• Forum - Contrôle, Expression, Conditions

Normalisation RT-PCR quantitative

Le problème, c'est que tes 2 échantillons ne sont pas probablement tout à fait à la même concentration. Pour corriger ce facteur, on réalise souvent une 2e PCR avec un gène de contrôle dont l'expression est censée ne pas varier entre les 2 conditions. Dans ce cas, tu vas comparer l'écart de cycle entre le Ct de ton gène-cible et le Ct de ton gène de contrôle dans chacun des 2 échantillons.  [...] En gros la quantification absolue n'est pas vraiment nécessaire. Ce que je veux, c'est plus une cinétique, ou une comparaison entre deux conditions environnementales... Style lumière entraine augmentation de l'expression, obscurité entraine diminution de l'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

pourquoi faut-il analyser une gène controle (exemple cyclophilline) dans le cas de la PCR semi quantitative.  [...] Le gène contrôle est un gène dont l'expression ne varie pas dans les différentes conditions testées. Il faut l'avoir testé pour être sûr qu'il ne varie pas dans ces conditions. Il permet ainsi de valider les différences d'expression observées pour les gènes d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Mon objectif est d'évaluer l'expression de 4 gènes au niveau de l'hypothalamus à savoir nNOS iNOS BDNF et CRF dans les deux conditions M et MAC par comparaison à la condition contrôle (T).  [...] Dans mon cas, pour ce type d'expression, il n'y a pas un seul gène qui ait une courbe de fusion correcte, cela ressemble à du bruit de fond. Cela m'embête énormément car ces gènes sont super bien modulés dans les conditions voulues par rapport au contrôle, ils sont assez nombreux, et les modulations sont reproductibles.  [...]

[Biochimie] qPCR en temps reel (absolu vs relative)

Prenons un exemple, on a une condition standard et une condition a tester et on veut connaitre une eventuelle surexpression/sousexpression d'un gene dans la condition experimentale par rapport a la condition standard.  [...] Pour moi je ne vois pas comment dans ces conditions on pourrait proceder sans introduire l'etude d'un gene dont l'expression ne varie pas que je nommerai gene controle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Approche proteomique

je ne suis pas sûre de comprendre l'objet de ta question. Une approche de protéomique sert à visualiser l'ensemble du protéome, pour cela on sépare effectivement l'ensemble des protéines par éléctrophorèse bidimensionnelle afin d'identifier des spots correspondant normalement chacun à une protéine.   [...] On compare un lysat contrôle au(x) lysat(s) que l'on étudie et on cherche à identifier les spots qui bougent de façon significative. Les protéines correspondante sont alors identifiées par spectrométrie de masse. Cela sert à identifier une expression différentielle de protéines sous les conditions que l'on étudie (traitement des cellules, RNAi.  [...]

Facteur sigma

L'ARN polymérase procaryote est composée d'une enzyme-cSur (E) et d'une sous-unité sigma. Chez Escherichia coli, il existe 7 facteurs sigma qui permettent la reconnaissance spécifique d'une classe de promoteurs. Le facteur sigma70, protéine indispensable, contrôle l'expression de la majorité des gènes au cours de la phase de croissance.  [...] L'entrée en phase stationnaire ainsi que certaines conditions de stress permettent l'induction du facteur sigmaS qui contrôle alors l'expression de nombreux gènes impliqués dans des fonctions comme la résistance aux stress, la réparation de l'ADN ou la virulence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Puces à ADN

Dans mon cas, on veut tester l'effet d'un traitement. Donc, on marque en vert l'ADNc non traité (contrôle) et l'ADNc avec le traitement en rouge (test). Après hybridation avec la sonde, si expression contrôle=expression test. le traitement n'a rien changé, si expression contrôle.  [...] expression test. sur-expression du gène étudié donc le traitement a eu un effet positif, si expression contrôle. expression test. sous-expression. Ai-je bien compris Et je ne comprends pas ce que veut dire concretement la sous-expression Est-ce que le traitement a eu un effet négatif Mais ça veut dire quoi.  [...]

[Génétique] Stochasticité dans l'expression des gènes

C'est assez court pour bien voir ce que tu veux dire. Aléatoirement selon quoi Dans des conditions exactes Observation d'une variabilité de l'expression sur le même lot de bactéries transformées.  [...] Quels mécanismes Dans l'expression d'un gène, je ne vois rien d'aléatoire. Sa régulation est conditionné par plusieurs facteurs de transcription dont l'activité de chacun est contrôlé par des mécanismes en amont senseurs de l'environnement cellulaire et de l'environnement extérieur à la cellule.  [...]

allèle + allèle -

Quand à ta question, à quoi servent ces allèles, on peut dire qu'en général ce sont plutôt des des inconvénients que des avantages, mais, une fois de temps en temps, un de ces allèles, dans certaines conditions, peut s'avérer avantageux. et voilà le moteur de l'évolution.  [...] Dolmen, arrete d'utiliser les sigles + et - qui ont une forte conotation fonctionnelle (+ = qui marche et - = qui ne marche pas) utilise d'autre symbole et tout ira bien.   [...]

Différence shARN, miARN et siARN

mais je ne vois pas le lien entre la pol. de l'Aquaporine et celle du sh, a moins que tu parles d'exprimer un sh sous le contrôle du promoteur de l'aquaporine Il n'y a pas de raison que ça ne soit pas possible, j'ai juste eu quelques lectures précisant que l'expression d'un sh est plus performante avec un promoteur polIII que polII (mais ça fonctionne avec un promoteur polII, comme le CMV par exemple, donc pas de raison).  [...] promoteur de pol II = expression régulée (transcrit en même temps qu'une autre protéine donnée) + contrôle spatial possible.  [...]