• Forum - Contamination, ADN, Amorces

qPCR résultats hors gamme standard!!!

Si les 2 séquences sont identiques, fait une PCRq avec un couple d'amorces placé dans un intron pour contrôler le niveau de contamination par de l'ADN génomique.  [...] 3) Je réitère ma proposition d'estimer la quantité d'ADN génomique contaminant par un couple d'amorce situé dans un intron. C'est un contrôle de contamination et de niveau de bruit de fond imparable.  [...]

[Biotechnologie] L'ADN mystère !!!

s'il s'agissait d'une contamination de l'un des réactifs, on aurait cette même bande pr ts les autres puits, ce ki n'est pas le cas, celles des échantillons étant largemt + faibles. Et s'il sagissait d'une contamination entre tubes test et tube témoin, l'intensité aurait été plus faible ou au pire identik à celles des tubes test.  [...] Cmt est-ce alors possible il ne peut pa s'agir d'une contamination extérieure par de l'ADN ki serait com par hasard homologue à nos amorces spécifik à P.fluo. et de la mm taille que l'ADN attendu... Génération spontanée... mdr on C plu koi penser. Aidez-nous svp.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

Il y a certaines choses qui me paraissent peu claires dans cette partie. Quand il est écrit elle retire les bases dans le sens 5'3' les bases dont il est question sont bien celles de l'amorce d'ADN (réplication terminée) Car d'après ce que je sais si cette enzyme a une fonction exonucléase 5'3' c'est qu'elle permet de dégrader les amorces d'ARN et de les rendre en amorces d'ADN, le champ d'action de cette enzyme est donc avant la réplication puisque les amorces après la réplication ne sont plus d'ARN mais d'ADN.  [...] Par ailleurs, il est dit qu'il a une activité polymérase 5'3' et une activité exonucléase 3'5'. s'il possède de telles activités enzymatiques cela signifie que c'est une enzyme Si c'est bien le cas quesque son activité polymérase 5'3' Et son activité exonucléase 3'5' Cette dernière ne peut plus correspondre au passage d'amorces d'ARN en amorces d'ADN puisqu'il n'y a plus d'amorces d'ARN après la réplication, alors quesque cette fonction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication

Si les ADN polymérases réalisent les liaisons phosphodiester, alors à quoi servent les ligases A ressouder les amorces remplacées par de l'ADN à l'ADN préexistant.  [...] de ce que j'en sais, l'ADN ligase sert surtout à fermer les césure finales. Une fois que toutes les amorces ARN ont été éliminé suite au passage de l'ADN polymérase, cette dernière se détache et l'ADN ligase se fixe pour finir les brins. (Donc surtout en fin de réplication je pense, après il y peut être cette relation avec les amorces, je regarde de ce côté là.).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'amorces

Nous avons de suite pensé qu'il s'agissait d'une contamination de l'un des réaactifs. Nouvelle PCR en changeant de l'eau pure. même résultat. une autre pcr mais cette fois ci en remplacant 'Mytaq'par un autre tube nouveau. le témoin donné toujours de bandes.  [...] Ce qui reste c'est les amorces. Durant j'avais trois amorces que je les tester,ont toutes donné une contamination au niveau du témoin NEGATIF, et ce qui m'étonne plus que le profil du contaminant ca diffère d'une amorce a l'autre.  [...]

Synthèse du brin retardé d'ADN

-L'ADN polymérase I sert à dégrader les amorces d'ARN grâce à son activité 5'3' exonucléase et les remplacer par de l'ADN grâce à son activité polymérase.  [...] A quel moment intervient la ligase Avant on après le remplacement des amorces ARN par de l'ADN Obtient-on d'abord un brin hybride ADN/ARN pour ensuite faire intervenir l'ARN polymérase I et obtenir un brin d'ADN.  [...]

amplification de l'ADN

L'amorce sert de point de départ pour la réplication. Et effectivement on connait sa séquence. quand tu fais de la PCR tu connais la séquence du fragment d'ADN que tu veux amplifier, et c'est toi qui choisis les amorces et tu peux les faire synthétiser.  [...] Après, il est possible de synthétiser de l'ADN de novo en rallongeant une chaine (enfin je pense ). Ca doit être comme ça que sont faites les amorces justement. Mais là on ne parle plus de PCR, ou d'amplification d'ADN.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

Gros gros brouillard autour de cette enzyme. On nous a expliqué qu'elle était utilisée pour nettoyer les machines PCR d'ADN encore présent et potentiellement contaminant. En effet, les Uracil glycosylases servent à couper les chaines d'ADN à coté des Uracils.  [...] Before a subsequent amplification reaction, contaminating PCR products are degraded using uracil-DNA glycosylase. The enzyme is inactivated at the beginning of the amplification reaction by heating to 95°C. Simultaneous strand cleavage of the U-DNA is achieved during this heating step.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Alors, pour synthétiser le brin complémentaire pendant la PCR, il faut des bases azotées (dNTP, les mono-nucléotides), des amorces pour ne répliquer qu'une partie de l'ADN (qui doit correspondre à la partie que tu veux explorer), et un milieu favorable pour que les enzymes de réplication fonctionnent bien (c'est le buffer, qui contient souvent du MgCL2).  [...] L'enzyme va copier l'ADN entre ces deux amorces. Elle a besoin de bases/nucléotides. dATP, dTTP, dGTP, dCTP. Elle ajoute donc bout à bout chaque base depuis l'amorce de départ jusqu'à l'amorce de fin. D'où l'utilisation de la Taq polymérase, des amorces et des dNTP.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN Polymérase alpha delta epsilon

L'ADN pol alpha peut synthétiser les amorces ARN (primer) et les allonger sur le brin à synthèse discontinue de l'ADN naissant. Pour le brin à synthèse continue le complexe ADN polymérase delta/PCNA synthétise le brin d'ADN.  [...] le complexe d'initiation (j'imagine ) créé une amorce ARN, et la synthèse peut débuter, c'est epsilon qui s'en charge jusqu'à ce qu'elle arrive à l'oeil de réplication adjacent.  [...]