• Forum - Contamination, ADN, Amorces

[Biotechnologie] L'ADN mystère !!!

s'il s'agissait d'une contamination de l'un des réactifs, on aurait cette même bande pr ts les autres puits, ce ki n'est pas le cas, celles des échantillons étant largemt + faibles. Et s'il sagissait d'une contamination entre tubes test et tube témoin, l'intensité aurait été plus faible ou au pire identik à celles des tubes test.  [...] Cmt est-ce alors possible il ne peut pa s'agir d'une contamination extérieure par de l'ADN ki serait com par hasard homologue à nos amorces spécifik à P.fluo. et de la mm taille que l'ADN attendu... Génération spontanée... mdr on C plu koi penser. Aidez-nous svp.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'amorces

Nous avons de suite pensé qu'il s'agissait d'une contamination de l'un des réaactifs. Nouvelle PCR en changeant de l'eau pure. même résultat. une autre pcr mais cette fois ci en remplacant 'Mytaq'par un autre tube nouveau. le témoin donné toujours de bandes.  [...] Ce qui reste c'est les amorces. Durant j'avais trois amorces que je les tester,ont toutes donné une contamination au niveau du témoin NEGATIF, et ce qui m'étonne plus que le profil du contaminant ca diffère d'une amorce a l'autre.  [...]

amplification de l'ADN

L'amorce sert de point de départ pour la réplication. Et effectivement on connait sa séquence. quand tu fais de la PCR tu connais la séquence du fragment d'ADN que tu veux amplifier, et c'est toi qui choisis les amorces et tu peux les faire synthétiser.  [...] Après, il est possible de synthétiser de l'ADN de novo en rallongeant une chaine (enfin je pense ). Ca doit être comme ça que sont faites les amorces justement. Mais là on ne parle plus de PCR, ou d'amplification d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Alors, pour synthétiser le brin complémentaire pendant la PCR, il faut des bases azotées (dNTP, les mono-nucléotides), des amorces pour ne répliquer qu'une partie de l'ADN (qui doit correspondre à la partie que tu veux explorer), et un milieu favorable pour que les enzymes de réplication fonctionnent bien (c'est le buffer, qui contient souvent du MgCL2).  [...] L'enzyme va copier l'ADN entre ces deux amorces. Elle a besoin de bases/nucléotides. dATP, dTTP, dGTP, dCTP. Elle ajoute donc bout à bout chaque base depuis l'amorce de départ jusqu'à l'amorce de fin. D'où l'utilisation de la Taq polymérase, des amorces et des dNTP.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN Polymérase alpha delta epsilon

L'ADN pol alpha peut synthétiser les amorces ARN (primer) et les allonger sur le brin à synthèse discontinue de l'ADN naissant. Pour le brin à synthèse continue le complexe ADN polymérase delta/PCNA synthétise le brin d'ADN.  [...] le complexe d'initiation (j'imagine ) créé une amorce ARN, et la synthèse peut débuter, c'est epsilon qui s'en charge jusqu'à ce qu'elle arrive à l'oeil de réplication adjacent.  [...]

[Biochimie] Demande de definitions

La polymérisation, est l'ajout de nouveaux nucléotides au brin d'ADN synthétisé par la polymérase. Cette synthèse débute à partir des amorces ARN.  [...] Lorsqu'on parle d'hybridation des amorces on parle de phénomene in vitro, et dans ce cas c'est en effet la complémentation des amorces d'ADN sur leurs séquences cibles.  [...]

[Biochimie] Réplication de l'ADN

Le prof nous a dit qu'il existait un brin retardé lors de la réplication de l'ADN, avec une amorce ARN. Il est synthétisé dans le sens 5'-3' et il est complémentaire du brin 5'-3'.  [...] Comme l'amorce d'ARN par la primase (car ADNpol ne peut pas initier une réplication tout seul) est avant l'ADNpol et va dans le même sens de réplication, il est produit de 5' vers 3' et la primase se déplace sur le brin parent de 3'vers5'.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

On a du mal a expliquer ces résultats. Notre théorie c'est que les amorces étaient contaminées avec d'autres amorces. Il peut aussi y avoir un problème dans les dillutions des Amorces. Est- ce qu'un problème de dillution peut expliquer ce résultats.  [...] Alors pour la théorie de la contamination ce sont des amorces utiliséees pour essentiellement faire des TP avec des étudiants donc une contaminations par d'autres amorces peut ètre possible.  [...]

les problèmes du séquençage

s'il vous plait, je me demande si quelqu'un pourrait m'aider.j'ai fait le séquençage d'un clone contenant de l'ADN ayant la taille de 1100pb avec les amorces T7 et SP6 mais le résultat a montré une région de très bonne qualité sur les 250 premiers nucléotides alors que le reste est contaminé et on observe un bourrage de pics.  [...] en d'autres termes,les fragments de différentes tailles obtenues suite a l'incorporation des ddNTP,normalement ils seraient issus de toutes les populations d'ADN présentes et donc pourquoi on ne trouve pas de contamination des le départ c'est a dire n'y a t'il pas de fragments contaminants de petites tailles.  [...]

microsatellites....qu'est ce que c'est ???

Oui bien sûr. Après avoir séquencé le génome, on a dressé une carte de répartition des microsatellites, avec pour chaque microsatt les régions flanquantes pour permettre l'amplification de ces microsatt.   [...] Par exemple, un individu aura (CA)134 et (CA)140 donc ça veut dire que sur unchromosome CA sera répété 134 fois et sur l'autre chromosome CA sera répété 140 fois... Mais tu peux avoir d'autres personnes qui sont (CA)132 et (CA)143 par exemple... Donc lorsque tu fais migrer ces séquences amplifiées par PCR (grace aux régions flanquantes), plus tu vas avoir de répétition, moins ton amplicon migrera loin sur ton gel comme dans une électrophorèse classique (le CA134 sera en dessous du CA140 sur le gel, etc.   [...]