• Forum - Construction, Niveau, Expression, Protéine

[Biologie Moléculaire] Concentration protéine cellulaire

J'aimerais faire une construction chez coli ou je peux controler le niveau d'expression d'une protéine.  [...] Est ce que cloné le gène après le promoteur T7 est une bonne idée Est ce que l'expression en protéine sera proportionnelle à la quantité d'IPTG.  [...]

[Biologie Moléculaire] co transfection??

-on transfecte une construction permettant l'expression constitutive d'une protéine capable de transformer un composé X en lumiere A. c'est ton controle de transfection qui te servira a normaliser l'efficacité d'entrée de la construction.  [...] -en même temps on transfecte une construction permettant l'exxpression d'une protéine permettant de transformer un composé Y en luimière B, expression dépendant du promoteur que tu veux étudier.  [...]

[biologie moléculaire] Probleme expression apres transfection stable

J'ai réalisé une construction en vue de l'expression d'une protéine en stable par des cellules HeLa. Le vecteur utilisé est le pIREShyg3, qui comme son nom l'indique contient.  [...] La construction a bien marché, le séquençage est OK, les cellules transfectées résistent à l'hygromycine (pas les cellules non transfectées contrôle), mais pas de trace de notre protéine, rien. alors que l'expression est importante avec un vecteur pCMV en transitoire.  [...]

[Biologie Moléculaire] différence entre 2 plasmides

Bonnjour à tous, voilà je lis un article en anglais sur une technique pour réprimer le gène PAX3 qui serait à l'origine d'un rhabdomyosarcome (dû à une translocation chromosomique), dans l'article on parle de expression plasmid et reporter plasmid je ne vois pas de quoi il s'agit, quelqu'un pourrait il m'aider merci beaucoup.  [...] Un plasmide d'expression est un plasmide qui une fois entré dans la cellule permet de produire une protéine alors qu'un plasmide reporter est une construction qui va permettre de reporter l'activité de la protéine synthétisée par le plasmide d'expression. Il s'agit le plus souvent d'un promoteur qui répond à la protéine produite qui est donc un facteur de transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] séquences régulatrices

Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question.  [...] Le séquençage permet donc de s'en assurer. Si l'expression tissu-spécifique de la protéine dépend de cette séquence, alors la construction hétérologue est un bon moyen de savoir si ton isolement est correct et si la séquence régulatrice isolée est intègre.  [...]

[Génétique] Stochasticité dans l'expression des gènes

En gros, je cherche à montrer que l'expression aléatoire des gènes est un désavantage d'une part puisqu'il induit un bruit de fond qui perturbe le fonctionnement de la cellule (désavantage in vivo mais aussi in vitro dans la construction de systèmes biologiques artificiels), mais c'est également un avantage puisqu'il pourrait permettre d'accroitre le potentiel d'adaptation par exemple.  [...] Je cherche ici à montrer que la cellule in vivo utilise des systèmes qui visent à contourner l'expression aléatoire des gènes. opérons, ordre des gènes dans le génome, compétition entre les ARNm au niveau de la traduction etc. Et qu'on peut mettre à profit ces découvertes in vivo pour les appliquer dans la construction de systèmes d'expression artificiels in vitro (afin de réduire le bruit de fond qui diminue le rendement).  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

J'ai besoin d'aide pour une question dans un exercice portant sur la construction d'un vecteur d'expression pour une proteine recombinante.  [...] Pour produire cette proteine de fusion dans les cellules de souris, il faut donc assembler un ADN recombinant puis de l'insérer dans un plasmide (ou vecteur ) d'expression permettant la transcription puis la traduction dans les cellules. Au préalable, afin de disposer de suffisamment de vecteur pour les cellules de souris, il est necessaire d'amplifier le vecteur dans le collibacille.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

Bon, alors je n'ai pas le temps de le lire en entier, mais ce n'est pas pour vérifier l'expression spécifique de la constuction et différencier ainsi d'une protéine endogène.  [...] ben oui, l'anticorps spécifique reconnaitrait les deux, alors que l'anti tag ne reconnait que la recombinante. Comme ca tu es sur que ta construction s'exprime, et tu peux en plus purifier ta protéine en utilisant ce tag (d'ailleurs c'est peut être ce qui a été fait non ).  [...]

[Biologie Moléculaire] construction d'une proteine tronquee chez la drosophile

Je dois mettre en place la biologie moleculaire dans mon nouveau labo, et dans mon projet de recherche je dois construire des proteines tronquees chez la drosophile.  [...] De plus voulant inserer les-dites proteines tronquees au sein d'un vecteur UAS, dois-je laisser des nucleotides avant mon ATG, ou je peux directement commencer avec lui.  [...]

Trangénèse > caroténoides > cossupression de gène ...

pour moi, la cosuppression d'un gène ou gene silencing est le fait d'éteindre l'expression d'un gène, c'est à dire d'entrainer l'arrêt de la production de la protéine qu'il code, en provoquant la destruction des ARNm de ce gène au fur et à mesure de leur production.  [...] En gros, si tu introduit par transgenèse une construction qui produit l'ARNm de ton gène-cible en grande quantité. Le système de régulation de l'expression du gène va détecter l'excès d'ARNm et détruire tous les ARNm de ce gène. Du coup, au lieu d'augmenter la quantité d'ARNm de ce gène et donc la quantité de protéines, on obtient l'effet inverse.  [...]