• Forum - Conservation, Bactérie, Glycérol, Concentration

[Microbiologie] Congélation de souche

Si tu pouvais préciser au moins le genre ou l'espèces que tu souhaites congeler, il serait plus facile de répondre à ta question car cela dépend de l'organisme étudier. Personnellement pour la conservation de bactérie j'utilise du glycérol à 40% en concentration final, cela suffit amplement à la conserver.  [...] Cependant j'ai pu remarquer qu'une souche bactérienne congeler et conserver aux -80°C de cette manière depuis près de 15 ans avait plus de mal à se reveiller qu'une souche récement congeler.  [...]

Plaques ELISA maxisorp, Covalink, Amino ?

en fait j'ai l'impression que quasiment rien ne s'adsorbe au fond de mes puits quand c'est mon anticorps qui est coaté par contre si je coate l'antigène pour le titre de l'anticorps (soit l'anticorps de capture soit le révélation) la ça marche super bien et j'ai meme des faibles concentrations d'antigènes par puits qui sont reconnues (2ng/mL 100µL/puits.  [...] D-Glycérol pour la conservation de tes Ac puis dans un tampon bicarbinate pour ton coating. Avec ceci essaie d revoir de temps à autre la concentration de tes réactifs en fonction des résultats obtenus. Attention la nature de tes Ac n'est pas connue.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

- La conservation de bactéries transformées dans 25% final de glycérol à -80°C vous semble t'il être un bon moyen de conservation.  [...] Sinon quand on veut améliorer les rendements de miniprep tu peux mettre du chloramphénicol quelques heures avant la fin de ta culture. Il va bloquer la multiplication bactérienne, sans affecter la replication du plasmide. Ainsi le nombre de copie du plasmide dans la bactérie augmente considérablement.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Le Glycérol c'est pas le top pour les cellules en général. Quand je congèle mes bactéries après miniprep la concentration finale en Glycérol est de 10% et je n'ai jamais eu aucun problème pour les faire repartir même en grattant un peu pour une midiprep de 200ml.  [...] Nous utilisions du glycerol pure et stérile (99%), pour une concentration finale de 25% (jusqu'à 50% pour les bactéries fragile, c'est à dire avec un grand plasmide (entre 15 et 20kpb).  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

A ne pas négliger, le fait que tu es choisi d'autres bactéries que celle du kit. Sont-elles compétentes pour une transformation par choc thermique Est-ce les mêmes que celles utilisées pour les clonages qui ont fonctionné précédemment.  [...] Le problème est probablement résolu depuis belle lurette, mais si quelqu'un est dans le même cas de figure, j'apporte tout de même mon grain de sel. Je pense que le problème est bel et bien que la transformation n'est pas fait dans la bonne bactérie. En effet, les plasmides issus de cette mutagénèse ne sont pas fermés, ils doivent donc être transformés dans des XL1 qui a la capacité de lier les deux bouts du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de Taq polymérase.

Je pense qu'il y aura qu'en même une amplification mais qui sera moins forte que si j'avais mis la bonne concentration en Taq car y aurai compétition.  [...] peut etre aussi un tampon de conservation de la taq qui se retrouve trop concentré (glycérol, azide,...).  [...]

[Physiologie] phage lambda

si on introduit l opérateur droit du phage lambda dans une bactérie dont le milieu de culture contient du glycérol comme seule source de carbone,la protéine CI est elle synthétisée.  [...] mais si on introduit un plasmide contenant (le répresseur de l'opéron lactose(lac I),l opérateur de l opéron lactose (lac OP)et la répresseur de lambda(CI)) dans une bacterie dont le milieu de culture contient du glycerol comme seule source de carbone.  [...]

milieu de conservation -80°C Légionelles

Je pense qu'un milieu classique de conservation de bactéries devrait suffire. Ils sont à base de glycérol, mais je ne connais pas la composition exacte.  [...] On conserve en général les bactéries à -80°C dans leur milieu de culture standart dans lequel on ajoute 20% de glycérol stérile.  [...]

Conservation du sang

cryoprotecteur (type glycérol). la conservation va de quelques mois à plusieurs années suivant la température de conservation. Cette technique est utilisée pour conserver des globules rouges avec un phénotype rare, pour des cas particuliers.  [...] le produit est mélangé aux globules rouges et le tout est congelé. Il faudra lors de la décongélation, laver les globules pour enlever le gycérole.   [...]

[Biologie Cellulaire] solution congélation 90%SVF 10%DMSO

biensur, moi quand je sais que je pars pour une semaine de congélation, je me fais 500 mL de milieu de cryoconservation (moi c'est 80% SVF et 20% DMSO, mais bon sa marche aussi pour toi je pense). Et donc je stock à 4°C et je le sors quand j'en ai besoin. Mais je le garde toujours à 4°C au frigo ou en glace quand je l'utilise.  [...] Est ce un milieu de cryoconservation pour des cellules eucaryotes doit être différent pour des cellules bactérienne (Je vais congeler E.coli, en pensant que le glycérol trop visceux est fortement déconseiller dans mon cas.).  [...]