• Forum - Congélation, Cellules, Densité

[Biotechnologie] Protocole congélation de cellules et ELISA

[Biotechnologie] Protocole congélation de cellules et ELISA.  [...] Je vous demande svp de me passer le protocole de congélation des cellules depuis quelle densité cellulaire dans le flask (70% ou 80% ou)... jusqu'au les mettre dans de l'Azote liquide. Si vous avez une image de la boîte où l'on mets les vials je vous remercie encore plus.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

lors d'un test sur des cellules de lignée NB4, nous avions avec mon groupe de TIPE comparer 4 cas avec les mêmes conditions de congélation et de décongélation en terme de vitesse, de gradient et de méthode de congélation (vapeur d'azote liquide à -80°C). On vérifiait après décongélation l'intégrité des cellules avec du bleu Trypan, un colorant qui normalement ne rentre pas dans la cellule.  [...] Mais cette économie de DMSO n'était pas si profitable que ça (d'où le fait que l'INSERM ne l'utilisait pas). en effet, quand on observe le temps de doublement de la population cellulaire juste après décongélation, on s'aperçoit que ce temps est plus élevé avec seulement 1% de DMSO.  [...]

[Biochimie] Avatar - Le film

J'aurais pensé que les cellules éclataient pendant la congélation (à cause de la prise de volume de l'eau). D'où vient le fait que les cellules éclatent pendant la décongélation.  [...] On peut mettre plus ou moins de produits protégeant de la congélation, congeler plus ou moins vite pour éviter la formation de cristaux. La difficulté est que les différents types cellulaires ont des comportements à la congélation différents. Du coup vous avez un comportement hétérogène des différentes cellules à la congélation.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cryoconservation embryonnaire : comment les cellules repartent à la vie ?

Je voudrais savoir, dans le procédé de cryoconservation, et vitrification. comment, après décongélation, les cellules reviennent à la vie.  [...] ben à partir du moment ou on respecte l'intégrité physique des membranes et des acides nucléiques, entre autres, (et c'est le plus critique) la congélation arrête tout processus métabolique (comme sur pause ). Et cela fonctionne pour des cellules non embryonnaires aussi (des cellules primaires, immortalisées, tumorales, etc...).  [...]

[Biologie Cellulaire] Au secours : Pb à la décongélation de cellules

La congélation a été faite par ma collègue mais il n'y a pas eu de souci. Elle fait toujours la même chose et toutes les autres cellules qu'elles décongèlent repartent sans problème.  [...] Ce sont uniquement les miennes qui ne repartent pas. Pourtant, j'ai suivi à la lettre le protocole de décongélation. décongélation rapide de l'ampoule à 37°C puis je mets les cellules dans 5ml de SVF pur, je centrifuge et je reprends dans du milieu RPMI (leur milieu de culture) et enfi je le mets à 37°C, 5% CO2.. Très peu avait adhéré le lendemain.  [...]

[Biologie Cellulaire] Induction d'apoptose 3T3

Est-ce qu'on peut retrouver ce résultat soit en laissant les cellules plusieurs jours dans très peu de milieu et sans le changer, ou en mettant nos cellules dans du milieu de congélation sans les congeler (si oui, après combien de temps environ).  [...] Oui j'ai acheté une Cool Cell pour congeler les cellules, et je pensais n'en décongeler qu'un cryotube, j'ai fait tous les calculs et je pourrai lancer ma manip 1 semaine après décongélation.  [...]

[Biologie Cellulaire] Contamination non identifiée

Ce genre d'aggrégat se produit lorsqu'il y a de la lyse cellulaire après décongélation, ce qui provoque l'aggrégation des cellules lysées. Lors de la décongélation de cellules, il n'est pas rare après avoir adhérer qu'elles aient des débris cellulaires collés à leur membrane.  [...] Cependant, si ces problèmes persistent après avoir changé le milieu de culture et avoir commencé les repiquages, c'est pas normal. Si tu as un autre lot d'ampoules de ces cellules congelées, je te conseille de le tester. En effet, certaines congélation peuvent être loupées et elles peuvent avoir fait dérivé tes cellules, ou être contaminées.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

J'ai trouvé ce complément d'info sur les cellules de Mamm en général, vraisemblablement d'après cet auteur, le -80°C n'est pas suffisant pour arrêter toute évolution des cellules. L'explication de la congélation est aussi intéressante - maintenant sachant que mes échantillons sont déjà congelés rapidement et progressivement et que j'ai le même résultat final, je ne suis pas sûr d'avoir une solution à mon problème.  [...] En général, on met 10% DMSO pour éviter la formation de cristaux d'eau lors de la congélation, cristaux qui, s'ils se forment dans les cellules, vont perforer les membranes. Pensez à quoi ressemble des fruits congelés une fois décongelés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gros problème de HEK

Quelle est la taille de la flasque que tu as utilisé pour décongeler les cellules Généralement, plus c'est une petite flasque, mieux c'est car la densité cellulaire est augmentée ce qui favorise la reprise des cellules. Quelle est la concentration en sérum de ton milieu.  [...] Pour le problème de congélation ces cellules viennent tout droit du fabricant donc j'ose espérer que tout a fonctionner correctement chez eux.  [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation du FACS

Ils nous ont aussi conseillé de fixer nos cellules soit en formol 2% soit en PAF 4% et de congeler azote liquide pour conserver. J'imagine bien évidemment qu'il faut rincer les cellules fixées avant de les congeler... La congélation est elle obligatoire, j'ai fait de l'immunoloc sur cellules et je n'ai jamais congelé j'ai toujours conservé mes préparation à 4°.  [...] Ma cinétique se déroulerait sur 40 jours et ça va être très difficile de le faire sur cellules fraiches. D'où la mise au point d'une methode de fixation/congélation la moins dénaturante possible. D'après ce que j'en sais la congélation à l'azote liquide devrait vitrifier l'eau ce qui n'endommage pas les cellules au moment de la décongélation mais c'est vrai que j'ai quand même quelques craintes.  [...]