• Forum - Conditions, Quantité, ADN

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

La probabilité de rencontrer un site Sau3A est donc de. 1*1/4*1/4*1/4*1/4*1= 1/256. On pourra dire que dans ces conditions, en moyenne, l'enzyme Sau3A coupe l'ADN tous les 256 nucléotides.  [...] Tout dépend des conditions de ta digestion, notamment de la quantité d'ADN génomique que tu fais digérer pour une certaine quantité d'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR de clones

Bonjour, comme la majorité des gens qui posent une question sur ce forum. je suis dans une impasse et j'ai besoin d'aide. Alors il y a encore quelques semaines, je pouvais amplifier par PCR classique l'ADN de lignées cellulaires avec mes contrôles (clones) et du jour au lendemain mes contrôles ne sortent plus.  [...] Tes conditions de PCR sont peut-être limites et ne permettent pas une amplification 100% mais dépendent d'autres variables inter-manips. Tu es sûr de chacun de tes réactifs.  [...]

[Biologie Cellulaire] Demande d'explication de résultat d'expérience

On mélange en quantité egale de l'ADN du bactériophage T4 marqué avec de l'azote 15, et de l'ADN froid du bactériophage T4. Le melange est chauffé a 95°c jusqua dénaturation complete, refroidi puis analysé par uultracentrifugation a lequilibre en chlorure de Césium ( centrifugation durant 48h a vitesse élevée ). 3 pics sont observé dans ces conditions.  [...] Justement, je vois pas ce qui pourrait ce passer puisque dans les deux cas c'est les mêmes conditions d'expérience, le seul parametre qui change c'est T5 a la place de T4...donc pour moi, c'est T5 qui est a l'origine de ce phenomere de difference de pics.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Le seul souci c'est que personne dans mon labo ne semble avoir de protocole pour ces manipulations. J'ai bien une idée des manips à faire, mais pour ce qui est des quantités à digérer et à ligaturer, de si je dois faire un gel ou non à chaque étape et tout et tout (sachant que mon insert est en faible concentration, moins de 7 ug/uL.  [...] Sinon, concernant les quantités insert/plasmide, je mets généralement un rapport de quantité 3.1. Par exemple, une de mes ligations est du genre. un plasmide qui fait 5,4 kb, je choisis d'en mettre 60 ng. un insert qui fait 1,3 kb. Si je veux être en conditions 3(insert). 1(plasmide), je mets 45 ng de l'ADN d'insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de culture de bactéries

* tu transformes tes bactéries compétentes avec le vecteur seul et tu étales sur la boîte sélective. Comment faire. tu digères ton plasmide comme si tu allais faire une ligation, mais à la place des inserts, tu ajoutes du tampon (même volume que le volume des inserts) et tu fais une ligation dans les mêmes conditions que celles de ton plasmide + insert.  [...] Il s'agit en fait de la quantité d'ADN de chaque partenaire de la réaction de ligation. Par exemple, une de mes ligations est du genre. un plasmide qui fait 5,4 kb, je choisis d'en mettre 60 ng. un insert qui fait 1,3 kb. Si je veux être en conditions 3(insert). 1(plasmide), je mets 45 ng de l'ADN d'insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise au point des conditions PCR

*Pour 10% de mes gènes environ, je n'ai pas d'amplification. J'ai essayé différentes méthodes. augmentation du volume de réaction, diminution de la quantité d'ADN, baisse du Tm de 58 à 56°C. Rien n'a fonctionné, je cherche donc d'autres méthodes qui pourraient améliorer mes conditions PCR.  [...] *La plupart de mes gènes appartiennent à des familles multigéniques. Pour 30% de mes amplifications, je me retrouve donc avec plusieurs bandes. Est-il possible de ne récupérer qu'une seule bande rien qu'en changeant les conditions PCR ou part un autre manière.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe de la LM-PCR

C'est une technique bien utile quand la quantitee d'ADN a etudier n'est pas suffisante. En revanche, ca reste une technique de PCR precedee d'une ligation, donc ce n'est en rien quantitatif.  [...] Il existe une variante, l'Inverse-PCR, qui est un peu moins sensible (une étape de PCR en moins par rapport à la LM-PCR que je faisais). Par contre elle peut être semi-quantitative (selon les conditions et la source d'ADN).  [...]

[Biochimie] Nom de code "La nature".

Est-ce que la question n'est pas plutôt existe t-il dans notre ADN un schéma à suivre pour survivre à certains changements de conditions.  [...] Enfin (), il y a le cas de l'adaptation non génétique, un schéma lourdement appliqué par l'espèce humaine (mais non exclusif à l'homme). En cas de changement de conditions, on peut rester sur place et changer son comportement, éventuellement avec une méthode non génétique (apprentissage) pour que les jeunes appliquent ce comportement.  [...]

Vapeur d'eau dans les poumons = danger ?

Physiquement la quantité de vapeur dans l'air ne peut pas dépasser la quantité correspondant à la saturation, ce qui dépend de la température et la pression. Dans le cas indiqué, les conditions sont très proches des standard.  [...] Or il est très courant de respirer la quantité max en conditions standards. c'est ce qu'il se passe quand l'hygrométrie est de 100%, par définition, une condition pas vraiment rare en climat tropical ou dans une serre.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protocole-Mesurer quantité de mitochondries

Je cherche un protocole qui permettrait de mesurer la quantité de mitochondries présente dans le foie entre différentes conditions de stress.  [...] En fait j'ai déjà mesuré l'expression du gène 12S sur le foie (poisson) entre différentes conditions. L'expression de ce gène peut être considéré comme un proxy de la densité mitochondriale. Donc pour confirmer les résultats que j'ai obtenu, j'aurais voulu pouvoir évaluer la quantité de mitochondries dans le tissu.  [...]