• Forum - Conditions, Protéines, Forme

[Biochimie] Electrophorése

je dirais qu'en conditions dénaturante les protéines ont en gros toutes la même forme et sont différenciés que sur la masse.  [...] Alors qu'en conditions non dénaturantes ils y a des différences de migration entre une protéine fibrillaire et une globulaire de même masse (la forme et la structure de la protéine joue aussi un rôle).  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

acides, protéases,... Enfin, le tampon permet de rester dans des conditions isotoniques qui contribuent au maintien de la forme native de ta protéine.  [...] Oui en se plaçant à un pH proche du pHi, on favorise la stabilité de la forme native de la protéine. En effet, la structure protéique est conditionnée par le pH qui va définir la charge des acides aminés déterminante pour la conformation finale de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Montrer une phosphorylation de protéine en WB

Ma protéine préférée apparait en WB comme un doublet de bandes très rapprochées sous certaines conditions. Je voudrais donc tester l'effet d'une phosphatase sur ma protéine pour vérifier si c'est une forme phosphorylée.  [...] Ben je pensais aussi qu'un phosphate sur une prot de 45kDa ne se voyait pas, mais apparemment si (d'apres mes collègues). En tout cas, je suis d'accord pour le maldi, c'est plus précis, mais on ne peut pas l'utiliser sur un lysat de protéines, et puis ce n'est pas le même budget.  [...]

pH d'une solution protéique et Western-blot

Si je fais migrer cette solution acide dans mon gel de Western-blot, est ce que cela aura un impact sur la migration Le pH change la conformation des protéines mais est ce que cette dénaturation () aura un impact sur la migration/transfert et/ou révélation.  [...] Pas étonnant, si c'est un Laemmli (conditions dénaturantes) c'est le SDS qui forme des patchs sur la protéine et la fait migrer. Et si le pH est trop acide, la charge peut ne pas être suffisamment négative pour obtenir une bonne migration.  [...]

transcription inverse Proteine

Donc si je suis ton raisonnement Yoyo, une protéine serait plus résistante aux conditions exterieures que l'ADN Et dns ce cas, effectivement ça serait une belle forme de conservation du materiel génétique.  [...] Au cours des génération, il pourrait alors éventuellement y avoir évolution d'un sytème de reconnaissance des bonnes protéines (à condition qu'il y ait un moyen de différencier ces protéines...).  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Les bandes d'actine ont un rôle de témoin. Par exemple, pour pouvoir comparer les deux conditions dans le gel A il faut que les deux bandes d'actine est la même intensité (ce qui veut dire que les quantités de protéines sont a peu près égales entre les deux conditions).  [...] en présence du siRNA UPS1 on a des bandes beaucoup plus sombres qui correspondent aux proteines PCNA ubiquitinilés, et dans la conditions control,on a une faibles ubuiquitinations des PCNA.  [...]

Immunoblot

C'est tout à fait ça. Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité). C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...] C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...]

[Biochimie] Du DTT dans mon buffer de RT-PCR

Dans la cellule eucaryote, l'environnement est plutôt réducteur à cause du glutathion. Pour la formation de ponts disulfures spontanés, il faut être dans des conditions oxydantes. Donc les protéines nécessitant des ponts disulfures pour leur structuration passent par la voie sécrétoire où elles rencontrent dans le RE une enzyme catalysant la formation de ces ponts (je ne me rappelle plus son nom mais c'est assez facile à trouver ).  [...] Wow. Effectivement, la RT qu'on utilise est tirée des retrovirus qui font pratiquement tout dans le milieu cytosolique réducteur de la cellule. Il semble normal que les protéines utilisées par le virus ne peuvent pas avoir de pont disulfure... et donc que le DTT ne l'affectera pas.  [...]

[Biochimie] DTT et WesternBlot

WesternBlot on ne peut pas plus classique. dénaturation des protéines 10min à 95°C dans du tampon de Laemli (contenant donc du SDS...). Bien sûr SDS-PAGE pour la migration... Donc en conditions dénaturantes.  [...] Alors je me demande vraiment si les étapes de préincubation au DTT étaient nécessaires, pour des protéines de rats je sous-entends (Pour des protéines d'organismes thermophiles par exemple ou autre organisme extrème on aurait pu se poser la QS de savoir si le bleu de Laemmli utilisé couramment induit des conditions de dénaturation suffisantes...).  [...]