• Forum - Conditions, Coupe, ADN

Qu'est-ce qu'une cellule érythroïde ?

Je suis en train de travailler sur un devoir de svt sur les gènes de globines et j'aurais besoin de quelques définitions pour le résoudre (je ne les ai pas trouvées sur le web).   [...] Par contre, pour la DNase, ce que je me demandais c'est justement dans quelles conditions elle coupe l'ADN, mais l'on m'a dit qu'elle intervenait pour synthétiser le deuxième brin d'ADN dans la chromatine. Est-ce que c'est le cas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

En général les oligos font 20-30pb et on essaye d'avoir un ratio équilibré entre les G+C et les A+T (dans ces conditions, une PCR aux température d'hybdridation classiques 51-58°C doit fonctionner). La restriction coupe ton ADN proprement, pas besoin d'ajouter des bases pour protéger ta séquence codante.  [...] En revanche on conseille de rajouter quelques bases entre le le site et l'extrémité 5' de façon à internaliser le site car les enzymes de restrictions sont des ENDOnucléases, il faut que leur cible soit au milieu.   [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

le meilleur conseil que je puisse te donner, c'est de revoir à chaque étape s'il y a des points critiques, et faire le nécessaire pour vérifier si toutes les conditions ont été remplis.  [...] Etant donné que j'essayé de trouver les conditions optimal de ma sonde je travail sur un adn connu. J'ai donc choisi mon enzyme de restriction de facon a ce qu'elle ne coupe pas mon gene. En plus j'ai 3 copie du genes qui sont legerement differente... Vous comprenez pourquoi je suis autant desespéré.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

La probabilité de rencontrer un site Sau3A est donc de. 1*1/4*1/4*1/4*1/4*1= 1/256. On pourra dire que dans ces conditions, en moyenne, l'enzyme Sau3A coupe l'ADN tous les 256 nucléotides.  [...] Tout dépend des conditions de ta digestion, notamment de la quantité d'ADN génomique que tu fais digérer pour une certaine quantité d'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Topo 1 et Topo 2 !!

Lors de la duplication du matériel génétique il se produit des phénomènes de torsions de l'ADN en aval de la fourche de réplication (processus physique lié à la structure de l'ADN). Pour éviter que l'ADN ne casse suite à ces contraintes physiques, la topoisomérase coupe un brin de l'ADN (activité hélicase) et le re-ligue ensuite (activité ligase).  [...] Pour faire simple les topoisomérases sont des enzymes permettant la dénaturation des super enroulements de l'ADN pour y permettre l'acces au materiel de réplication. pour ce faire il me semble que la topo 1 coupe un seul des 2 brins et défait les supertours négatifs sans énergie nécessaire et la topo 2 coupe les 2 brins d'ADN et défait les supertours négatifs et positifs avec consomation d'ATP.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Pour vérifier qu'un ADN est coupé, il faut le mettre en présence de désoxyribonucléotide fluorescents, si l'adn est coupé ces désoxyribonucléoitides vont se fixer sur l'extrémité 3'OH libre, est cela.  [...] L'électrophorèse est une bonne idée. quand un ADN est coupé, il n'a plus la même taille, d'où le choix de l'électrophorèse qui est LA technique permettant de séparer des molécules d'ADN de tailles différentes.  [...]

replication

- l'ADN pol 3 prend des nucléotides triphosphates, coupe les 2 phosphates de l'extrémité libre afin de pouvoir incorporer le nucléotide monophosphate à la suite du brin néosynthétisé (juste synthétisé).  [...] - réaction très exergonique (c'est de la thermodynamique ) ^^. lorsque tu coupe la liaison phosphate entre le 1er (alpha) et le second (beta) phosphate, ça libère de l'énergie. Cette énergie est transmise à ta polymérase 3 qui l'utilise ensuite pour lier le nouveau nucléotide (celui dont les phosphates viennent d'être fraichement coupés) au nucléotide précédent (celui synthétisé juste avant).  [...]

Enzyme de restriction: petite difficulté avec sa définition

D'après mon cour, une exonucléase détache des nucléotides terminaux, une endonucléase coupe les liaisons à l'intérieur de la chaine. Toujours d'après mon cour, une enzyme de restriction est une endonucléase... C'est ce que je ne comprends pas. cette enzyme de restriction semble couper la séquence de nucléotides aux extrémités, comme le fait une exonucléase.  [...] une enzyme de restriction reconnait un site (=une séquence) spécifique sur l'ADN et coupe de chaque coté de ce site. Si le site est à l'extrémité d'un brin d'ADN linéaire, alors elle peut couper.  [...]

VIH et LT4

Dans le cas de VIH et durant le cycle de réplication du VIH dans la cellule, plus précisément quand l'ADN viral entre la cellule LT4 et avant qu'il arive au noyau de mettre des nucleotides précurseures et ARN polymérase et l'ARNm (viral) se forme puis la traduction et ensuite la formation du proteine virale puis une complexe HLA I - peptide (viral) et ensuit LT8 tue LT4 infectée, dans cette condition production et formation de nouveux VIH.  [...] Durant l'Integration.L'ADN linéaire issu de la phase de transcription inverse est transporté dans le noyau de la cellule. Cet ADN est intégré à l'ADN cellulaire grace à l'action de l'intégrase qui est une enzyme qui coupe l'ADN cellulaire et recolle cet ADN avec l'ADN virale.  [...]

plasmide-clonage

aprés avoir rendu les bactéries compétantes et les avoir coupé avec des enzymes de restriction, on peut faire rentrer la molécule d'adn dans les bactéries, ensuite il faut repérer les bactéries ayant reçu ce géne.  [...] En général (hors système Bleu-blanc de la B-Gal), on extrait l'ADN des colonies ayant poussé (miniprep. on pique une colonie, on la fait pousser en culture une nuit dans un milieu liquide contenant l'antibiotique en question, puis on la casse et on purifie son ADN) et on coupe l'ADN avec des enzymes de restriction pour déterminer quelle colonie possède le fragment d'intérêt (on dit alors que la colonie est un clone positif ) et l'ADN de cette colonie est alors amplifié par Midipreps pour être utilisé.  [...]