• Forum - Concentration, Tampon, Extraction

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Mais lorsque je dose ensuite mes protéines extraites, la BSA est utilisée dans la gamme étalon. Dans quelle mesure la BSA présente dans mes extraits (puisque dans le tampon d'extraction) ne va pas fausser la quantification des proteines extraites par la suite.  [...] Sauf que le BSA doit avoir précipité aussi et la reprise du culot va modifier la concentration en BSA parasite de mon extrait par rapport à la gamme étalon si je la fait dans mon tampon d'extraction (avec PVPP et BSA).  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Le tanpon que tu souhaites utiliser est un tampon d'extraction donc pour moi le plus important c'est qu'il te permettes d'extraite ta protéine avec un rendement maximal et tout en gardant l'activité de ta protréine. La composition que tu as donné me parait classique.  [...] Ensuite concernant ta seconde question. Difficile a répondre sans connaitre ton protocole expérimental (composition tampon, volume tp vs volume extrait enzymatique,...). Peux tu me donner quelques élements de réponses si ce n'ai pas trop confidentiel Mais sache qu'il existe des méthodes pour changer de tampon après ton extraction pour conditionner ta protéine dans un autre tampon... (Dialyse, unité de concentration,...).  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

- Mes solutions stocks de sulfate de protamine et de sulfate d'ammonium doivent elles être préparées dans de l'eau ou dans mon tampon d'extraction (important, il contient 20% de glycérol qui doit largement modifié la solubilité des deux sels précédents) J'ai tenté de préparé le sulfate de protamine dans le tampon et j'ai de gros problèmes de solubilité.  [...] Effectivement, à ta place, je diluerai les solutions stocks dans de l'eau. Il suffit juste que tu adaptes leur concentration pour qu'in fine tu obtiens la bonne concentration finale dans ton tampon d'extraction.  [...]

[Biochimie] B-Galactosidase d'origine vegetale

1- Pour l'extraction, j'ai fait bcp de recherche puis j'ai constate que le tampon d'extraction le plus utilise est le NaOAc avec du mercaptoethanol. Comment savoir le %, la concentration de mon tampon.  [...] pour la precipitation tu dois utiliser le tableau avec les concentrations de sulfate d'ammonium c'ad combien de grammes de sulfate d'ammonium faut ajouter pour avoir 40% puis tu regardes a partir de 40% combien de grammes tu dois encore ajouter pour avoir 70%.  [...]

Réactifs de biomol

Temps que j'y suis, les colonnes d'extraction d'acides nucléiques sont des colonnes échangeuses d'ions, c'est bien ça Dans ce cas, je ne me souviens plus par quel mécanisme se fait l'élution des acides nucléiques (tampon contenant une faible concentration en sels dixit Mme la Notice d'Utilisation).  [...] Maintenant je cherche à comprendre comment l'élution des AN s'effectue. dans la composition de mon tampon d'élution (compris dans le kit ) ils insistent sur le fait que la concentration en sels diminue. Donc j'imagine que c'est cette diminution de concentration en sel qui permet l'élution des AN, mais par quel mécanisme.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

j'ai une question à vous poser, lors de la préparation de la gamme étalon SBA est ce qu'on utilise pour la dilution l'eau distillée ou le tampon avec lequel on a fait l'extraction des protéines.  [...] je ne parle pas d'ici de la dilution de l'échantillon,mais je parle de la dissolution de SBA.Est-elle dans de l'eau distillée ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Cellulaire] Calculer la concentration en mitochondries issues d'une extraction.

Nous pensons faire une extraction de mitochondries thermogènes et en mesurer la concentration pour que nous puissions travailler sur un même échantillon.  [...] - est-il possible de calculer la concentration de mitochondries a partir d'une mesure spectrophotométrique (genre à partir d'une courbe étalon ou autre).  [...]

[Biochimie] Fractionnement cellulaire

j'ai fait un Tp, il ya peu de temps sur le fractionnement cellulaire, et je ne comprend pas trop le faite d'avoir ajouté dans mon tampon HSB, du Nacl 0.35M avant la récupération de la fraction nucléaire.  [...] Je pense que c'est plutôt une question de pression osmotique. Pour les protocoles d'extraction nucléaire, au moment de récupérer le noyau les tampons sont bien plus riches en NaCl. Le noyau doit être un milieu plus concentré en solutés que le cytoplasme. Pour ne pas qu'il éclate, on se place à une concentration isotonique donc on augmente la concentration en sel...simple supposition.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai testé differents protocoles d'extraction, mais aucun ne contient du phénol, un tampon maison. Tris 10mM pH8.4, KCl 50mM, MgCl2 1.5mM, Tween 45% et un tampon commercialisé par Viagen. Le Direct PCR, je n'en connais pas la composition mais il doit être équivalent.  [...] J'ai testé beaucoup de paramètres pendant 2 mois (ADNg, tampon d'extraction, tampon de PCR, primers, machine PCR, tampon de migration...) et je ne trouve pas l'origine du problème.  [...]

[Biochimie] migration sds page

je fais une extraction de cytosol total sur des plaquettes sanguines et je les dénature en les faisant bouillir avec un tampon glycérol/SDS avant de les faire migrer.  [...] je ne connais pas le kit d'extraction que tu utilises mais est ce que ça ne serais pas plutôt lui qui est pourri. Je veux dire, pour une raison ou une autre (trop vieux, pas bonnes conditions de stockage...) est ce que le pH des tampons de ton kit n'aurait pas varié, ou il n'y aurait-il pas eu précipitation ou concentration (du a une évaporation) en sel (je parle toujours des tampons).  [...]