• Forum - Concentration, Quantité, Protéine

[Biologie Moléculaire] gel 1D

pourtant après dosage la quantité de protéines semble suffisante j'ai par exemple 1.6µg/µl je ramène tout les échantillons à cette concentration, j'ai engagé une plus grande quantité de protéine 65µg. j'ai vérifié les pH des tampon tris pour les deux gels (concentration et séparation) je travaille avec la même source.  [...] je voudrai savoir aussi si le fait de d'augmenter la tension un peu peut provoqué ça je fais ça parfois quand je viens le matin pour activer la migration, mais j'ai toujours eu l'habitude d'avoir de beau gels.   [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion sur colonne !

L'autre façon de voir les choses c'est que plus une protéine est en grande quantité plus elle va être éluée sur un nombre de fraction importante. Donc cela tu peux le vérifier puisque tu as fait des dosages par bradford. Regarde la concentration de chaque protéine dans chaque tube puis calcule la masse ou la quantité de chaque protéine.  [...] Après coloration par la méthode de Bradford (bleu de Comassie se colore en bleu en présence de protéines dans une solution acide) et mesure de l'absorbance du complexe formé à 595 nm.  [...]

enrichissement de fractions

A mesure que l'on purifie, la concentration du produit d'intérêt devrait augmenter. En enzymologie, une méthode pour suivre cela est de suivre l'activité enzymatique (en gros la quantité de substrat consommé [ou de réactif formé]/unité de temps/quantité de protéine [ou volume]).  [...] En général, on dose les protéines et on fait une réaction enzymatique. On a donc le volume, la quantité de protéine et l'activité enzymatique (Unité enzymatique).  [...]

mitose et taille du cytoplasme

Si je me souvient bien de mes cours, il y a en effet une protéine qui est produite tout au long du cycle cellulaire, afin que sa concentration dans le cytoplasme reste constante. Donc sa quantité (en nombre, et pas en concentration) est proportionnelle à la taille de la cellule.  [...] Je ne suis pourtant pas parvenu ni a retrouver le nom de cette protéine, ni son site d'action exacte. Si quelqu'un a un peu plus d'informations, ou même pour confirmer ce que je dis, je suis preneur... ça commence à faire quelques temps que je touche plus beaucoup à de la biologie cellulaire.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'actine est, bien entendu, une protéine ubiquitaire dont on estime que les différents traitements appliqués aux cellules ne vont pas modifier la concentration. Ainsi, on s'en sert pour certifier que l'on a bien déposer la même quantité globale de protéine dans les deux puits (contrôle et expérimental).  [...] Concernant la quantité de PCNA j'avoue que là aussi je ne sais pas. Nous savons juste par l'énoncé que c'est une protéine chez l'humain qui est ubiquitiné quand il y a un stress. Peut-être que ces cellules contiennent naturellement autant de PCNA...car je ne pense pas qu'ils en ait rajouté dans les cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

Elle serait quantitative si vous déposiez une gamme de concentration de la protéine que vous souhaitez quantifier. En général ce que l'on fait c'est que l'on utilise une protéine standard (l'actine) et on dilue les échantillons pour avoir la même quantité dans tous les puits.  [...] Il est possible en western blot d'observer des variations de quantité de protéines, mais il faut être prudent pour éviter les biais méthodologiques. par exemple quand j'en faisais, j'utilisais comme référence la quantification d'un de mes échantillons, le même tout au long de la manip, je déposais chaque échantillon en double avec 2 concentrations différentes (ce qui me permettait de vérifier la proportionnalité entre mes 2 dépôts.  [...]

calcul de concentration

Cela dépend de la méthode de dosage. Sans colorant particulier, les protéines absorbent à 280 nm, avec Bradford, je crois que c'est 540 nm.  [...] Avec l'équation de la droite de régression, tu peux touver la quantité de protéine dans ta prise d'essai (5 ou 10µL) et donc ta concentration.  [...]

[Immunologie] Réponse par anticorps

- En plus les anticorps restent en relativement faible quantité dans le sang. Pour qu'il y ai une réaction sur une protéine dérivé du soi qui reste en faible concentration (et bien sur sans adjuvant) ya peu de chance.  [...] La réponse se faisant aussi bien dans les ganglions que dans la circulation. Les facteurs qui déterminent le nombre de cellules a activer sera surtout la quantité d'antigène, et leur qualité dans une moindre mesure (différence avec les CMH (1 et 2)).  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...] Cela peut aussi permettre de passer la protéine d'un tampon à un autre, il suffit d'éliminer une forte quantité de tampon (ne jamais faire arriver la protéine à sec) et d'ajouter à la quantité restante le tampon voulu. Avec cette méthode, la protéine reste sous forme native et soluble, contrairement aux méthodes de précipitations.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Pour les techniques de marquage métabolique ou de western, les questions ne sont pas du tout les mêmes. L'un permet d'estimer la quantité de protéine synthétisée (attention aux protéines instables et rapidement dégradée), l'autre c'est la quantité de protéines présente à un temps donné (néosynthèse ou pas, dégradation ou pas).  [...] En fait, je crois que la PCR quantitative est plus fine pour quantifier, mais comme le northern, cette technique va m'indiquer la quantité de proteine présente à un temps t, or je veux connaitre le taux de transcription d'un ARN et pas sa concentration.  [...]