• Forum - Concentration, Protéines, échantillon

[Biochimie] Question protéine

Pour moi les notions de valeur biologique des protéines et de grandeur d'une absorption n'ont aucun sens. Ni l'une ni l'autre. Je ne comprends donc même pas comment vous avez pu répondre à votre première question.  [...] L'absorbance mesurée par spectrophotométrie à la longueur d'onde adéquat permet de déterminer la concentration de protéines dans un échantillon donnée.  [...]

[Biochimie] Unité enzymatique

En effet merci mais c'était juste pour m'éclaircir un peu car enfaîte j'ai un échantillon ou on a une activité de 0,754 UE/mL et je dois déterminer la masse en mg de protéines, la concentration de ces mêmes protéines en mg/mL et enfin l'activité spécifique en UE/mg.  [...] L'unité internationale notée U(I) correspond à la quantité d'enyme permettant de transformer 1 micromole de substrat par minute.   [...]

[Biochimie] Au secours!

I - Une gamme étalon est réalisée à partir de sérumalbumine bovine (SAB), une protéine que l'on peut purifier en grande quantité à partir de sérum de boeuf, et qui est utilisée de ce fait comme protéine de référence. On admet par conséquent qu'un échantillon protéique d'origine biologique quelconque, d'absorbance A, a la même concentration en protéines qu'un échantillon de SAB traité dans les mêmes conditions et ayant la même absorbance A.  [...] La solution mère de SAB a pour concentration initiale C0 = 1 mg.mL-1*. une fraction aliquote de cette solution est diluée au 1/10è pour réaliser la gamme étalon sur la base des concentrations suivantes. 25 / 50 / 75 / et 100 µg.mL-1. Après addition du réactif de Bradford, les absorbances suivantes sont obtenues.  [...]

[Biochimie] Coloration Bradford.

Ce qui t'es demandé, c'est de déterminer la masse totale de protéines en général dans ton échantillon, pas de déterminer une masse molaire globale (je suppose que c'est ce que tu as compris).  [...] Donc tu détermines la concentration protéique de tes tubes. En connaissant le volume total d'échantillon, tu le multiplies par la concentration trouvée et tu tombes sur la masse totale de protéines présente dans chacun des tubes.  [...]

spectrophotométrie

Donc, si tu sais que ton échantillon est de la protéine pure, et que tu a le coeficient d'absorption des protéines à 280nm tu en déduis la concentration de ton échantillon en protéines (enfin, l'ordinateur la calcule pour toi, en l'occurence).  [...] Attention si tu as dans ton échantillon des produits qui absorbent aussi la lumière à 280 nm ta mesure en sera faussée, tu sur-estimera la concentration, car le spectrophotomètre ne différencie pas les produits entre eux, c'est juste une mesure globale.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

je te conseille de diluer ton échantillon protéique (dans le tp avec lequel tu fais ton 0/blanc) pour que ta Do de l'échantillon rentre dans ta gamme BSA. Après tu trouves la valeur/concentration de ton [B][B] échantillon dilué et tu fais ton calcul pour la concentration finale de ton échantillon en tenant compte de la dilution que tu as effectué.  [...] En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.  [...]

[Biochimie] Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

Enfin, pour la dernière question, l'hydrolyse acide d'une protéine a pour rôle de cliver la protéine en peptides. est-ce que cette méthode impacte sur la concentration en acides aminés que tu analyses ensuite.  [...] concernant la dernière question, je pense que tu devrais prendre en compte la formule liant le pH au concentration d'acide de base et de protons.  [...]

Test ELISA

J'ai réalisé un test ELISA en TP afin de déterminer la concentration d'une protéine dans un échantillon. Afin que ce test soit quantitatif, j'ai réalisé une gamme de concentration. Après mesure de l'absorbance, j'obtiens des résultats aberrants qui ne sont pas interprétables (à la fois pour ma gamme de concentration et pour mon échantillon).  [...] C'est difficile de dire ça à priori pour les échantillons que tu testes vu que t'es pas sensé connaître la concentration, mais si ta gamme à foirée il y a un souci technique, qui peut venir de plein de choses différentes. coating mal réalisé, dilution ratées (en général pour la gamme on fait des dilutions 1/2 en cascade donc pour se planter faut quand même y mettre du sien.  [...]

[Biochimie] Plusieurs questions sur les chromatographies échangeuses d'ions et d'affinité

Cependant,à la question Les protéines de l'échantillon P3 ont un Point isoéléctrique différent des protéines C (graphe 3,filtration par affinité) j'ai répondu faux car je me suis dis. les protéines en P3 proviennent indirectement de l'échantillon P1,or en P1,on a certainement trié par gradient de pH sachant que les protéines attérissent toutes dans le même endroit cela implique qu'elles ont le même pI,car si elles avaient un pI différents j'ai réalisé un graphique que vous trouverez dans l'encadré vert qui montre distinctement qu'elles n'ont pas le même pI donc j'ai répondu faux, mais le prof a mis vrai.  [...] Généralement elle contient un tampon (maintenir le pH constant à une valeur donnée), une concentration en sel (généralement supérieure à 50mM pour éviter les intéractions entre la phase stationnaire et les protéines). Ensuite ton tampon peut contenir d'autres molécules mais là ça dépend de ton protocole.  [...]

[Divers] Electrofocalisation

Les protéines vont migrer de toutes manières, jusqu'à que leur charge nette soit nulle. Dans un échantillon de plusieurs protéines, il vaut mieux le placer au centre, de cette manière les protéines migreront rapidement jusqu'à leur pHi respectif. Si tu mets l'échantillon à une extrêmité, alors il se peut que l'une de tes protéines aient à parcourire l'ensemble du gel avant de s'immobiliser... je ne sais pas si tu me suis.  [...] Non, ce n'est pas du tout la raison. Sinon, autant faire un gel deux fois plus petit. On dépose l'échantillon au centre car il y a des protéines chargées positivement et d'autres négativement, et donc il va y avoir des protéines qui vont migrer des deux côtés du gel, comme tu peux voir ici.  [...]