• Forum - Concentration, Intérêt, Quantité, échantillon

différence entre la PCR quantitative relative et absolue?

Dans certains articles sur le web, ils parlent de PCR en temps réel semi quantitative Est ce la même chose que la PCR quantitative relative.  [...] Rapidement, je dirai que la PCR quantitative relative, c'est estime des variations d'un messager d'interet par rapport a un messager qui n'est pas cense varier au cours de l'experience (genre GAPDH). L'absolu, c'est faire une PCR sur une gamme de concentration connue de ton gene d'interet et de le comparer a la quantite que tu as dans ton echantillon a tester.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Car c'est surement une mauvaise lecture de ma part, mais en te lisant j'ai eu l'impression que tu voulais une gamme pour relier directement a une quantité en ng ou nmol initiale de ton gène, un peu comme en biochimie on prépare une gamme de BSA pour obtenir une concentration de protéines.  [...] Donc meme si tu as une séquence de ton gène en plasmide, que tu l'amplifie dans des bactéries, que tu l'extrait des bactéries, pose sur gel puis extrait du gel ta bande d'intéret, la purifie puis quantifie, tu auras la concentration que tu pourras diluer et te servir en qPCR, mais la meme quantité de transcrits, sur de l'environnemental ne donnera pas les mêmes résultats (ou alors il ne faut pas que tu utilise des primers dégénérés sur ton témoin car pour une meme quantité de primers tu n'auras pas le même taux de fixation, mais même dans ce cas, ton efficacité E ne sera pas la meme entre ton standard et ton echantillon).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Car moi ce qui m'intéresserait si c'est possible c'est de savoir au final dans mon échantillon, quel est la quantité en ng de mon gène d'intérêt. Es ce que cela est possible et si oui comment on peut le faire.  [...] En principe, tu devrais connaître le nombre initial de copies de ta molécule d'intérêt (en fait, du fragment d'intérêt) dans ton échantillon. Tu peux alors en déduire ta quantité de cette molécule en ng.  [...]

Test ELISA

J'ai réalisé un test ELISA en TP afin de déterminer la concentration d'une protéine dans un échantillon. Afin que ce test soit quantitatif, j'ai réalisé une gamme de concentration. Après mesure de l'absorbance, j'obtiens des résultats aberrants qui ne sont pas interprétables (à la fois pour ma gamme de concentration et pour mon échantillon).  [...] C'est difficile de dire ça à priori pour les échantillons que tu testes vu que t'es pas sensé connaître la concentration, mais si ta gamme à foirée il y a un souci technique, qui peut venir de plein de choses différentes. coating mal réalisé, dilution ratées (en général pour la gamme on fait des dilutions 1/2 en cascade donc pour se planter faut quand même y mettre du sien.  [...]

[Immunologie] Test elisa

je ne voit pas, si l'on sort du contexte du test Elisa, pourquoi il faut diluer une solution d'anticorps. Je comprend que si la solution d'AC et trop peu concentrer tous les AG ne seront pas détectés mais en cas d'excès En effet si l'anticorps est en forte concentration par rapport a l'antigène le surplus est logiquement enlever par les étape de saturation et/ou de lavage au détergent.  [...] Est-ce suffisant cela peut aussi poser problème si je fais un autre test elisa dans le but et de doser un antigène puisque si ma concentration en antigène et très forte la quantité d'ac sera inférieur a la quantité d'AG. quel est la solution dans ce cas on procède a des dilutions de l'échantillon d'antigène.  [...]

[Biochimie] detection de l'epo

j'ai un dossier à faire sur le dopage sportif à l'EPO et j'aimerai savoir comment on détermine quantitativement l'EPO recombinante après l'électrophorèse sur gel.  [...] Une solution éventuelle et de faire co-migrer sur le gel de l'EPO recombinante, à différentes concentrations connues pour chaque piste. Après quantification de l'intensité des bandes (si vos bandes sont quantifiables) vous tracez une droite Intensité = f(concentration) et ainsi vous connaissez la concentration en EPO de votre échantillon, en la ramenant sur la quantité déposée.  [...]

[Biochimie] Au secours!

I - Une gamme étalon est réalisée à partir de sérumalbumine bovine (SAB), une protéine que l'on peut purifier en grande quantité à partir de sérum de boeuf, et qui est utilisée de ce fait comme protéine de référence. On admet par conséquent qu'un échantillon protéique d'origine biologique quelconque, d'absorbance A, a la même concentration en protéines qu'un échantillon de SAB traité dans les mêmes conditions et ayant la même absorbance A.  [...] 3 – Tracer la courbe A595nm = f (concentration en SAB) et calculez la pente de la droite d'étalonnage, que vous exprimerez en mL.µg-1. Quel est l'intérêt d'un tel calcul.  [...]

[Génétique] Polymerase chain reaction

Aussi, j ai appris que la PCR en temps reel permet de quantifier precisement un fragment d adn d'interet present initiallement dans un echantillon, je ne comprend pas comment (Je comprends que cette technique permet de voir le nombre d'adn en temps reel mais comment obtenir la quantite initiale).  [...] Pour la qPCR, lorsqu'on est en phase d'amplification, c'est à dire avant de saturer le système, la quantité d'ADN néosynthétisée par la réaction est proportionnelle à la quantité initiale (plus il y en a au début, plus on en amplifie, plus on le détecte tôt).  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

La PCR est donc une technique de purification ou de clonage. L'ADN extrait à partir d'un organisme ou d'un échantillon contenant des ADN d'origines.  [...] d'ADN matriciel contenue dans l'échantillon PCR n'aura pas varié. En revanche, la quantité de la ou des séquences amplifiées (l'ADN d'intérêt).  [...]

[Biochimie] fonctionnement d'un stacking gel

J'ai bien compris à quoi sert le gel de stacking ( à ce que l'échantillon soit concentré sur une bande très fine avant d'entrer dans le gel de séparation ), mais par contre, je n'ai pas du tout compris son fonctionnement.  [...] Vu que le front d'arrière-garde avance plus lentement que le front pilote, les deux fronts vont être de plus en plus éloignés l'un de l'autre non en quoi ça participe à la concentration de l'échantillon Et qu'est-ce que la quantité de protéine-SDS vient faire là dedans.  [...]