• Forum - Concentration, Finale, Tampon

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] Pour bien faire les choses, tu devrais réaliser ta gamme BSA étalon dans le tampon d'extraction, comme ça plus de problème avec la BSA du tampon.  [...]

[Biochimie] tampon phosphate

Si tu mélanges deux tampons qui contiennent 50 mM de phosphate, quelle sera la concentration en phosphate dans le tampon final.  [...] Ou dit d'une autre manière. est-ce que si tu mélanges deux liquides ayant la même concentration en sucre le mélange obtenu sera plus sucré que les deux liquides pris séparément.  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

Je me dis qu'il faut certainement le préparer dans l'eau mais du coup, je fais diluer le tampon d'extraction de ma protéine. Dans la publication, les auteurs ne spécifient rien. Pourriez vous m'éclairer svp.  [...] Effectivement, à ta place, je diluerai les solutions stocks dans de l'eau. Il suffit juste que tu adaptes leur concentration pour qu'in fine tu obtiens la bonne concentration finale dans ton tampon d'extraction.  [...]

[Biochimie] Préparation tampon phosphate

4. Mesure du pH et ajustement du pH s'il n'est pas ok. Pour ajuster, il faut ajouter un acide (ou une base) ne contenant QUE les espèces en solution.   [...] mais je veux savoire si la concentration du tampon phosphate finale est de 50mM et comment je met un pH 7,4.  [...]

[Biochimie] TP de PCR preparation tampon de lyse

et on veut preparer 5 ml de tampon de lyse a concentration finale (TRIS 10mM. EDTA 1mM + SDS 0.5% + proteinase K 100µg/ml).  [...] il manque une donnée non je comprends que le volume totale du tampon doit faire 5ml, mais comment faire les differentes dilutions de chaque solutions si on a pas le volume final de chaque d'elles.  [...]

Sds-page

Et pour ce qui est d'utiliser du SDS à la fois dans les gels et dans le tampon de migration, pensez vous que cela interviens dans la concentration finale du SDS et donc de son rôle pourquoi ne pas en mettre que dans le tampon.  [...] Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité).  [...]

[Biologie Moléculaire] Impossible de récuperer ma protéine GST-X

je produit en Bl21 des protéines GST-X, la production a été mise au point et la protéine est bien exprimée. Lorsque je veux récuperer cette protéine, j'utilise un tampon de lyse contenant du lysosyme, Dnases ( avec MgSo4 et CaCl2) à de très forte concentration, il y a du triton, du chaps et une forte concentration en sels à 1M, tris-Hcl à pH8 mais je n'arrive en aucun cas à sortir ma protéine.  [...] - les cellules sont pas lysees. Pas besoin d'incuber tes cellules ON dans le tampon de lyse. Ca devrait aller plus vite que ca, en plus c'est pas top de garder des proteines si longtemps. Utilises un tampon tout bete Tris + lyzozyme a 37 deg 30' puis rajouter du SDS pour une concentration finale de 1%.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Pour obtenir une tension de 90 V j'ai dilué le tampon concentré 10X (fourni avec le kit) au 20ème(conctration finale 0.5X TBE) Avec cette nouvelle concentration l'alimentation limitée à 30mA disjontait immédiatement.  [...] Je suis d'accord avec Annaick_R. Essaye du tampon 1x ou 0.5x avec une concentration d'agarose de 0.8% sur un petit gel, voir même 0.6% comme dit plus haut. Ton kit de lambda digéré c'est un vecteur c'est bien ça Donc s'il est digéré tu devrais voir une bande assez haut sur ton gel (dans les 2kb environ) et tu peux laisser migrer moins longtemps.  [...]

[Biochimie] Protocole IMAC

En général, on rajoute de l'imidazole à une concentration finale de 20 mM (pour une colonne de nickel, 10 mM max si c'est une colonne de cobalt) dans le lysat (avant le dépôt sur la colonne) et dans le tampon de lavage pour diminuer la fixation de contaminants sur la colonne.  [...] Mais si c'est la première fois que tu fais cette purif, je te conseille de ne pas en mettre et de faire un gradient lors de ton élution (on utilise généralement un tampon contenant 200-250 mM d'imidazole quand on ne fait pas de gradient). Voilà les grandes lignes.  [...]

[Biochimie] Protocole extraction des histones

Ton TCA dans quoi est-il solubilisé De l'eau je suppose. Ensuite, lors de la préparation du tampon où se trouve le TCA, y a-t-il un moment où tu ajoutes de l'eau Car tu peux ajuster ce volume d'eau au volume de TCA que tu ajoutes. Cela n'est rendu possible que si la concentration finale en TCA n'est pas trop proche de 20%.  [...] Au pire si je trouve pas d'autres protocoles, je vais essayer de faire 1.25V de TCA (x5 en fait) en jouant sur le volume V pour pas qu'il soient trop elevé pour pas trop diluer mes histones et j'augmenterais le temps de centrifugation... Qu'en pensez vous.   [...]