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[Biologie Moléculaire] Concentration ADN plus élevé au picogreen qu'aux UV (spectrométrie)

J'ai fait plusieurs quantifications d'ADN et voilà que la concentration de mes échantillons est plus élevée au picogreen qu'aux UV. Voici comment je procède.  [...] Ce sont des échantillons d'ADN humain provenant de Buffy Coat (couche de cellules blanches du sang). Je prends 4 ul d'ADN que je dilue dans 196 ul de TE 1X (donc une dilution 1.50). Je lis ensuite la plaque dans le lecteur absorbance (UV) ce qui me permet de déterminer la concentration ainsi que la pureté.  [...]

[Biochimie] Dosage de substrat en point final

Pour la question 1 j'aurai pas formulé comme ca, c'est pas tant un problème de concentration, c'est plus en rapport avec la transformation en produit.  [...] Généralement on utilise cette technique pour mesurer la concentration d'une molécule sachant qu'elle n'absorbe pas dans l'UV/visible, en revanche une enzyme permet la formation d'un produit qui absorbe, on se sert de cette réaction en point final pour mesurer la concentration en Produit et donc revenir à la concentration en substrat.  [...]

Dosage spectro

Bonjour, je passais des échantillons pour analyser le coating HRP Streptavidine-Biotine (Biotine liée à de l'ADN) sous la spectrométrie à UV et j'ai des pics à 218nm (A=1,538) et à 277nm (0,006).  [...] Cela dit. 218nm, ça peut peut être des cycles phénoliques ou la présence de carbohydrates. votre échantillon n'est probablement pas propre.  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

Cette technique sert surtout à doser la concentration après extraction. C'est souvent ce même ADN qu'ensuite on utilise en PCR, donc on le multiplie de façon exponentielle.  [...] Les autres modèles sont effectivement des spectros UV pour des échantillons de très faible volume. Leur limite de détection est donc celle d'un spectro UV classique, soit environ 1ug/ml (DO260=0.02).  [...]

[Biochimie] Absorbance de la molécule d'ADN

Expérimentalement, on montre qu'une solution d'ADN simple brin a une absorbance plus élevé qu'une solution de même concentration d'ADN double brin, lequel a une absorbance plus faible qu'une solution de dNTP.  [...] Ta réponse est meilleure que l'histoire du solvant. En fait, c'est juste une question de géométrie. Dans de l'ADN double-brin, les bases sont empilées et ce sont bien elles qui absorbent les UV. Si un photon recontre une base et est absorbé, cet empilement fait que la base qui est juste derrière celle qui a absorbé le photon est dans l'ombre et ne pourra donc pas être détectée, ce qui conduit à sous-estimer la concentration réelle.  [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...] Si tu n'as rien en bas de ton gel il est peu probable que tout se dégrade. Il est possible que tes echantillons soient trop concentrés, essaye de les diluer 10 et 50 fois et redepose sur gel. La derniere fois que j'ai fait ca j'ai vu mes beaux ARNr apparaitre c'etait magique.  [...]

Mesure de l'activité antioxydante

Un millilitre de l'extrait à différentes concentrations (de 0,007à 2,5mg/ml) est mélangé avec 2,5ml d'une solution tampon phosphate 0,2 M (pH 6,6) et 2,5ml d'unesolution de ferricyanure de potassium K3Fe(CN)6 à 1%.L'ensemble est incubé au bain-marie à 50°C pendant 20 min ensuite, 2.  [...] 700nm contre un blanc semblablement préparé, en remplaçant l'extrait par de l'eau distillée qui permet de calibrer l'appareil (UV-VIS spectrophotomètre). Le contrôle positif est représenté par une solution d'un antioxydant standard. l'acide ascorbique dont l'absorbance a été mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons.  [...]

altitude et végétaux

Juste pour être sûr de bien me faire comprendre. quand tu éclaires une plante de manière uniforme, l'auxine se répartit uniformément dans la plante. Maintenant si tu l'éclaires avec la même source lumineuse mais de manière non uniforme, la concentration d'auxine ne change pas mais bien sa répartition.  [...] C'est un fait objectivement établi. l'auxine est l'hormone de croissance des plantes et sa répartition (et non sa concentration) dans la plante dépend de l'ensoleillement.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN

petite précision, l'ADN absorbe les UV a 260 nm, donc je suis sur de la longueur d'onde que j'ai choisi pour la lecture de la densité optique.De plus je trouve que l'expression de la concentration se fait par microlitre indépendamment du volume final du moment que chaque ul contient une quantité donné d'ADN.  [...] Regardez les bouquins de n'importe quel kit commercial, ils indiqueront une quantité qu'il est possible de récupérer à partir d'une quantité de produit, pas une concentration, car elle est fonction du volume qui est fonction de nos envies.  [...]

[Biochimie] Problème de transformation

Tu as fait une vérif de concentration (spectro UV) après ligation et une vérif de ligation en faisant migrer ton produit de ligation sur agarose on peut peut-etre envisager (selon ce la précision que tu désires) une PCR sur produit de ligation avec des amoces de ton gène d'intérêt ou du gène kan R.  [...] D'où l'intéret de toujours vérifier que les colonies que tu isoles sont résistantes en raison de la présence du plasmide, et non d'une mutation spontanée. Ceci dit, si tes bactéries 'transparentes' ne poussent pas quand tu les repiques, ca veut dire que c'est des faux positifs.   [...]