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[Biochimie] Extraction ARN

Je suis actuellement en train d'extraire des ARN viraux par méthode double extraction trizol-trizol LS et lorsque j'ai effectué la migration sur gel, je n'observe que très rarement les deux bandes caractéristiques à 18s et 28s. Normalement, je devrais observer deux belles bandes pour chaque échantillons puisqu'après quantification, j'ai pu voir que mes ARN étaient en concentration satisfaisante ( entre 0.5 et 1.8 µg/µL).  [...] Hier j'ai essayé de refaire migrer des échantillons en faisant resolubiliser un peu les culots ( 10min à 65°C). Le profil que j'obtient est différent de celui que j'obtenais au départ. je vois pratiquement que des doubles bandes après une resolubilisation ce qui est positif puisqu'au départ je ne voyais presque pas de doubles blandes.  [...]

Concentration négative et résultat PCR

J'ai extrait des mitochondries à partir des myoblastes de souris, le culot qui s'est formé était petit, je l'ai resuspendu dans le réactif recommandé, en fait quand j'ai mesuré la concentration de mes échantillons en utilistant la méthode de BradFord, le spectro m'a indiqué des concentrations négatives,méme quand j'ai pris les valeurs de l'absorbance pour calculer les concentrations à partir de relation y= ax+b, les valeurs étaient négatives aussi, est ce que vous pourriez m'aider à expliquer ces valeurs négatives, s'il vous plait.  [...] Une deuxième chose,pour le teste de détection de mycoplasme basé sur une simple PCR,j'ai eu. les 3 bandes qui correspondent à mes échantillons étaient moins intenses que le controle négatif, je me suis dis que peut étre mes échantillons étaient inhibés, j'ai refait mon PCR mais j'ai eu le méme résultat.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Le problème c'est pour la suite, on doit rendre un résultat scientifique (j'ai déjà calculé le % de contamination et je suppose que je doit utiliser les données fournies mais à part la concentration en ADN total, je ne vois pas ce que je dois faire des autres ) et un autre que même l'agriculteur producteur des échantillons est capable de comprendre (importance des dégâts, traitement possible si oui lequel...).  [...] En effet j'ai fait une gamme d'étalonnage (avec différentes dilutions de l'ADN de champignon) qui m'a servie pour ma régression linéaire, j'ai ensuite estimé la Concentration en ADN de champignon des échantillons. Les amorces sont bien spécifiques de la séquence à amplifier et j'ai réaliser 3 répétition de témoin eau.  [...]

[Biochimie] Expression protéique

Ce que je veux dire, c'est qu'un ARN qui ne contient que la région codante de ta protéine ne donnera pas de protéine. Il faut un site de fixation du ribosome, des éléments de régulation, etc. La régulation a lieu au moment de la transcription, de la stabilité du messager mais aussi lors de la traduction.   [...] Dernière possibilité, si ta protéine est produite à un taux extrêmement faible, il existe des méthodes pour enrichir la concentration des protéines faiblement exprimées dans des échantillons protéïques totaux. Cela permet d'augmenter le signal de ta protéine et de la détecter par Western.  [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

Les inconvénients sont une possibilités de contamination en prélèvement les échantillons, une contamination possible pendant la PCR, méthode qui demande de la rigueur et une technicité.  [...] Dans mon stage, on a utilisé la méthode de la PCR multiplex à temps réel. On veut effectué une prévalence sur 471 échantillons de bovins. Utilisation de la PCR-RAPD n'est pas adaptée, car il faut une étude au préalable sure de l'ADN pur des parasites et des différentes races de bovins étudiées pour les différencier ensuite.  [...]

Le scénario de l'origine de la vie enfin déterminé ? - Page 7

Le Réacteur de Simulation d'Évent Hydrothermal (RSEH), conçu et construit au JPL, produit des échantillons salins et concentrés en soufre dissous comme l'hydrosulfure et dans les échantillons avec un pH moindre, du fer. Ceci rend l'analyse de composés organiques dont la concentration est basse difficile.  [...] Ce travail démontre la capacité des systèmes ¼CE-FIL portables d'analyser des biomarqueurs à très basse concentration dans des échantillons extrêmes et complexes et soutien de manière préliminaire la formation d'acides aminé et de petits biopolymères contenant des acides aminés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration ADN plus élevé au picogreen qu'aux UV (spectrométrie)

Ce sont des échantillons d'ADN humain provenant de Buffy Coat (couche de cellules blanches du sang). Je prends 4 ul d'ADN que je dilue dans 196 ul de TE 1X (donc une dilution 1.50). Je lis ensuite la plaque dans le lecteur absorbance (UV) ce qui me permet de déterminer la concentration ainsi que la pureté.  [...] Lorsque je compare les concentration de mes ADNs mesurées avec les deux technologies, alors qu'on devrait s'attendre à avoir une concentration plus élevée avec le UV c'est plutôt le contraire qui se produit et ce avec tous les échantillons (peu importe la provenance du client) que j'analyse.  [...]

[Biochimie] Méthode de Bradford

de mon coté je rencontre des difficultés pour tracer la droite,je sais que ça sera la DO en fonction de la concentration de BSA.mais le problème c'est qu'on a utilisé 5 tubes dont un est le blanc plsu deux autres de 1/10 et 1/100 de serum dilué (notre échantillon à doser est l'immun serum),dans ce cas la comment je tracerai ma droiteest-ce qu'elle passera par le zero ou nonet comment interpréter mes résultats.  [...] Ensuite tu reportes sur la courbe la DO que tu as obtenu pour tes deux échantillons (1/10eme et 1/100eme) et tu n'as plus qu'à lire la concentration de tes échantillons (en n'oubliant pas de rétablir le facteur de dilution). Pour être plus précis tu peux également calculer la concentration à partir de l'équation de la droite. A toi de voir.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.  [...] Du moment que l'absorbance est comprise entre 0 et 1 et que les échantillons ne sont pas trop concentrés, la relation linéaire entre l'absorbance et la concentration est conservée.  [...]

Important! besoin d'aide pour extraction ARN sur cellules de cerveau! pleaseeee

Je suis actuellement en train d'essayé une méthode au trizol/ phénol-chloroforme (sur des échantillons de coeur et d'aorte de souris afin de mettre au point la technique). Auriez-vous des idées et étapes importantes à faire primordialement afin de récupérer au maximum d'arn via mes échantillons de CMLV-B.  [...] un exemple de quantité récupérée et de concentration Les quantités que je récupère jusque maintenant avec le kit sont de l'ordre de 3 à 10ng/uL dans 20uL selon les échantillons (ce qui est très juste pour nos RT et qPCR derrière.. on à pas intérêt à se planter après.  [...]