• Forum - Concentration, Courbe, Fusion

Comment mesurer la fluidité d'une membrane...

+ J'ai pensé aussi à mesurer le point de fusion de la membrane, cad, chauffer de plus en plus et voir quand elle se désagrège. Si auparavant une courbe étalon a été réalisée en mesurant le point de fusion d'une bicouche lipidique simple, puis en mesurant le point de fusion d'une bicouche lipidique + une concentration X en cholestérol etc., il serait possible de doser la fluidité nan.  [...] Pour la dernière idée, il faudrait dans ce cas que la membrane soit une simple micelle, sans activité biologique à l'intérieur. Les cellules peuvent modifier la concentration des différents composants pour survivre aux changements de température. A quelle vitesse exactement s'effectue ces changements, je n'en sais rien mais ça pourrait modifier vos valeurs.  [...]

[Biologie Moléculaire] QPCR, courbe Tm?

Si ces primers sont connus pour etre bons, (teste par ton labo avec courbe de fusion a l'appuis ou publie et sans moyen de regarder les courbes), alors c'est soit quelque chose qui a change dans ta manip (origine du mix annealing concentration des primers etc) et si ce n'est pas le cas, c'est que soit tes primers sont devenus mauvais avec le temp (ou contamine par quelque chose) soit que ton ARN/cDNA est different et qu'il requiert une optimisation (genre quantite d'ARN plus faible, du coup moins de cDNA, du coup les primers sénnuient et se dimerisent ).  [...] la courbe donne quoi pour la gamme standard, est ce qu'en dessous d'une certaine concentration la courbe de fusion donne des produits aspécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-qrt-PCR : courbe de fusion et autres contrôles

On me dit également que cela permet de vérifier qu'il n'y a pas eu de formation de dimères de primers. S'il y en avait eu, quelle allure aurait la courbe de fusion.  [...] Mais quel est le rapport avec les dilutions Comparer des échantillons différemment dilués permettrait de voir si l'amplification dépend bien uniquement de la concentration d'ADNc initiale et non d'un manque de chance statistique lié aux raisons que tu viens d'énoncer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul du Ct à partir d'une courbe de fusion en QPCR ...?

Je suis censé trouver le Ct et identifier la courbe de fusion pour 3 de ces 60 gènes (numéros 54 E6, numéro 56 E8 et numéro 59 E11 ).  [...] Si tu as toutes les données, essaie de tracer différens graphiques en faisant varier les colonnes que tu prend en abscisse et ordonnée, jusqu'a obtenir des courbes qui ressemblent a ceci.  [...]

[Génétique] UV et dimères de pyrimidines

pour contrôler le niveau d'apoptose des cellules traitées, selon les concentrations, une étude par cyto. Le problème c'est que je n'arrive pas à trouver comment détecter des dimères de pyrimidine... séquençage HRM courbe de fusion.  [...] c'est donc 12 lésions qu'il faut pouvoir quantifier dans l'ADN. Pour cela, nous réalisons tout d'abord une hydrolyse enzymatique qui libère les bases normales sous forme de nucléosides. Les photoproduits sont eux hydrolysés en dinucléosides monophosphate, soit deux nucléosides reliés par un groupement phosphate.   [...]

[Biologie Moléculaire] qrt PCR : gène de référence avec 2 Tm

Le Tm est calculé par le progamme, en obtenant le ou les maximum de la dérivée de la fonction de la courbe de fusion (= le ou les points d'inflexion de la courbe de fusion).  [...] De plus les températures sont aussi définies pour une concentration de MgCl2. Si celle ci est différente, ce qui arrive si tu utilises des kits tout faits, la température sera légérement différente. Inférieure en diminuant la concentration, supérieure en l'augmentant.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

La courbe de fusion représente la décroissance de fluorescence de l'agent intercalant donc la quantité d'ADN double brin en fonction de la température que l'on fait augmenter (l'ADN double brin se dénature de plus en plus).  [...] en haut, c'est la courbe de fusion native, elle représente la fluorescence en fonction de la t°. Elle est obtenue à la fin de l'amplification.  [...]

[Biologie Cellulaire] exocytose+endocytose

Ces vésicules vont être (ou pas) acheminées vers le golgi, où en fusionnant avec les dictyosomes, vont libérer leur contenu dans ces derniers, et les protéines vont subir des o-glycosylation etc. afin de rendre ces protéines fonctionnelles (ajout de sucre.  [...] .). Ensuite, même histoire, bourgeonnement de la membrane du golgi, et exocytose des vésicules (qui subissent souvent un traitement protéolytique en cours de route. acidification, concentration..) par fusion des vésicules avec la membrane plasmique.  [...]

[Biochimie] qPCR :

Pendant ces 5-6 cycles la quantité d'amplicons augmente considérablement. Etant donné que l'aire sous la courbe de fusion (intégration de l'équation dF/dT = f(Température)) est proportionnelle à la quantité d'amplicon généré, il est évident qu'arriver à saturation de la PCR permet d'avoir un pic d'intensité plus forte, plus propice à être résolu.  [...] Mes 10 cycles supplémentaires n'ont donc pour but que d'avoir une belle courbe de fusion, précise, qui permet de voir d'autant mieux la présence de produits non spécifiques. Le plus couramment utilisé est 40 cycles mais j'ai pu voir dans quelques publications des auteurs pousser jusqu'à 50 cycles, ce qui m'a décidé de faire pareil.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Ensuite grâce aux cycles critiques des 4 génes que tu étudies tu peux retrouver grâce à la courbe la concentration initiale en ADN pour tes 4 gènes.  [...] Tu compares juste tes échantillons entre eux avec pour conclusion quelque chose du genre la concentration en ADN de tel échantillon est 10 fois plus élevée que dans celui-ci.  [...]