• Forum - Concentration, ADN, Réaction

[Biologie Moléculaire] plasmide recombinant et ADN ligase

j'ai un TP de digestion enzymatique et je suis bloquée sur une question concernant la circularisation d'un fragment d'un plasmide (ce dernier a été hydrolysé par l'enzyme de restriction Agel,ensuite incubé avec la klénow en présence de 4 dNTP, ensuite digéré par EcoRV puis son plus grand fragment contenant 2 sites BglII est purifié).   [...] Enfin, tu veux que ton fragment se recircularise, c'est à dire que l'un de ses bouts se lie avec son autre bout... Autrement dit, tu veux favoriser une réaction intramoléculaire. Dans quelle condition cela est favorisé Il faut que tu choisisses une concentration optimale en ADN. élevée ou faible.  [...]

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger.   [...] Après l'amplification d'un brin matrice par PCR, il y aura des produits PCR, pour un séquençage par la méthode de sanger, ces produits pcr doit être purifiés mais lors de la réaction de sanger, comment on évalue la concentration d'ADN, c'est à dire après la PCR on obtient plusieurs fragments d'ADN alors que par la méthode sanger c'est un seul fragment qui sera séquencer à ma connaissance.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Les cellules de Ecoli et l'ADN plasmidique interagissent de façon productive en présence d'ions calcium et à base Température (o-5°C).  [...]

Ajuster la concentration d'ADN

Voilà j'ai fais une extraction d'ADN (champignons), après quantification, j'ai obtenu des concetrations différentes. comme j'ai de nombreux marqueurs à faire passer, j'aimerais ajuster mes concentration d'ADN pour ne pas avoir d'empatement lors de la révélation des produits de ma PCR (comme c'est déja arrivé).  [...] Cf est la concentration finale, c'est toi qui dois la fixer. Pour l'ADN, le plus pratique si c'est possible est de fixer à 1gamma, soit 1mg/ml (ou ug/ul, c'est la même chose...). Mais c'est toi qui choisis... Vf est le volume final de la réaction, c'est encore toi qui choisit.  [...]

Pcr

Des concentrations élevées en ADN polymérase peuvent causer l'amplification de produits non spécifiques ou l'échec total de la réaction.  [...]

Réactin enzymatique

Il faut que j'utilise cette concentration afin de trouver ma concentration finale et ensuite trouver mon unité enzymatique de ma réaction. Merci de votre aide.  [...] Concernant toujours cette réaction enzymatique, j,aimerais savoir pourquoi quand on veut savoir l'effet du pH sur la vitesse de réaction, on utilise une concentration non-limitante de notre substrat ( paranitrophényl phosphate). Merci.  [...]

[Biochimie] mode action enzyme

On voit que la vitesse de réaction augmente avec la concentration en susbstrat jusqu'a un palier ou toutes les enzymes sont liée a un substrat on dit que les enzyme sont saturées car plus il y a de S à dégrader par l'enzyme et plus la réaction mettra du temps à se faire.  [...] Maintenant on voit que cette molécule A améliore la vitesse de la réaction catalytique avec toujours une réaction plus lente quand la concentration en S augmente. ceci va comme explication.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

La réaction de polymérisation en chaîne est réalisée dans un mélange réactionnel qui comprend l'extrait d'ADN (ADN matriciel), la Taq polymérase,  [...] la réaction d'amplification peut se réduire à une copie unique. La quantité maximale ne peut en aucun cas excéder 2 ¼g. En général, les quantités utilisées se situent dans une gamme comprise entre 10 et 500 ng d'ADN matriciel.  [...]

[Biologie Moléculaire] dosages enzymatiques

Tu trouves donc la concentration de NADH et grâce à l'équation de la réaction catalysée par la lactate déshydrogénase (LDH), tu en déduis celle du lactate. Et vu que 1 mole de lactate est consommée pour donner 1mole de NADH, la concentration est la même. Attention après à ramener cette concentration à celle de ton échantillon de départ qui a généralement été dilué.  [...] Mais pour être sûr d'avoir calculé la vraie concentration de lactate, il faut que la réaction catalysée par la LDH soit totale. Or, elle a plutôt tendance à tendre dans le sens de la formation de lactate. Donc il faut coupler une deuxième réaction à celle-ci qui permet de consommer tout le pyruvate formé.  [...]

Enzyme de restriction

3- Aprés la réaction de la question 2, pourrait-on toujours joindre les extrémités Bam HI par incubation avec l'ADN ligase de T4 Pourrait-on joindre les extrémités Pst I (L'ADN ligase de T4 peut joindre aussi bien des extrémités franches que des extrémités cohésives).  [...] Ta réponse n'est pas bonne. L'amorce est le 3'OH crée par la coupure, l'ADN pol va pouvoir recopier les quelques nucléotides qui sortent. MAIS l'ADN pol n'est capable de synthétiser l'ADN QUE de 3'-. 5'. Autrement dit elle ne peut amorcer la réaction qu'a partir d'un 3'OH et pas d'un 5' phosphate.  [...]