• Forum - Concentration, ADN, Rapport

[Biochimie] qPCR en temps reel (absolu vs relative)

Grace a cela je pourrais calculer successivement le deltaCt (qui me permet une normalisation) puis le deltadeltaCt et connaitre ainsi le nombre de copies en plus ou en moins de mon gene teste dans les conditions experimentales par rapport aux conditions standard en calculant E a la puissance deltadeltaCt.  [...] * Si je veux ramener cela non pas a un simple nombre de copies en plus ou en moins par rapport a la condition standard, je vais devoir faire des dilutions (de plasmide + gene teste ou d'ADN genomique ou autre...) afin de faire coincider les valeurs de Ct a une concentration etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

J'ai obtenu les Ct (cycle où le seuil est franchi), j'ai fait la régression linéaire (log Concentration ADN par rapport aux Ct) -. J'ai donc la concentration en ADN de champignon des échantillons.  [...] Tu dis avoir fait une régression avec le résultat de tes échantillons...qui devaient être des contrôles avec des concentrations d'ADNc connus afin de réaliser une gamme et de venir placer le résultats de ton échantillons test dessus, n'est ce pas.  [...]

mix pcr

oui c'est vrai, j'ai essayé d'ajouter un mix à mon extrait de pcr et de relancer, il semble qu'une amplification a eu lieu cette fois ci, j'ai une concentration de 2600ng/µl et un rapport 260/280 de 1.6, cependant j'ai un doute est ce que c'est mon adn qui a été amplifier ou bien c le produit de mes propres amorces.  [...] Tu as probablement raison. Mais vu la concentration élevée, tu peux avant faire une migration du produit PCR sur gel (d'agarose), afin de confirmer la taille (seulement si la taille de ton fragment amplifié est bien supérieur à celle de tes amorces - 5/10 fois minimum).  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

Je crois, la concentration initiale de l'ADN plasmique initiale EST juste la concentration initiale du fragment digéré dont tu as besoin, parce que pour un plasmide, il n'existe qu'UN fragment de 784 bp qui est celui que tu cherches (la moitié 5' du gène, oui ).  [...] Je profite de topic pour vous demander autre chose. Je dois aussi réalisé une PCR. J'ai lu mon cours, le topic dessus sur Futura, mais je me demande quelque chose. Je dois faire un génotypage de plante, et je ne connais pas la concentration en ADN (donc en matrice).  [...]

Variation de la concentration d'ADN dans les tubes de plastique?

Allo, j'ai un problème à résoudre. Je fais des expérience sur des tubes en polypropylène pour l'entreposage de l'ADN génomique à 4°C et j'ai remarqué que dans le temps la concentration de mon ADN varient. Lorsque mes tubes ont été préalablement autoclavé, j'ai une perte que a de 20 à 50% de la contration de mon ADN.  [...] J'ai déjà essayé une marque de tube supposément low binding, mais la concentration de mon ADN dans ses tubes varie quand même. Est-ce que tu aurais des suggestions de fournisseurs à me proposer.  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Bonjour, je voudrais savoir s'il existe un moyen de calculer la concentration d'ADN dans une solution avec comme seule information la masse d'unités osidiques que contient celle-ci (les bases, sucres et phosphates ont été séparés et sont toujours présent dans la solution).  [...] La concentration change au fur et à mesure des étapes Je pensais que comme à chaque étape on ajoute une enzyme qui ne fait que séparer les bases ou les sucres ou les phosphates, les quantités de matière restent les même et donc la concentration reste inchangée.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-qrt-PCR : courbe de fusion et autres contrôles

Bon en fait, ce qui peut jouer c'est tes concentrations en amorces, Taq, et accessoirement dNTP et les temps des différentes étapes.  [...] Mais quel est le rapport avec les dilutions Comparer des échantillons différemment dilués permettrait de voir si l'amplification dépend bien uniquement de la concentration d'ADNc initiale et non d'un manque de chance statistique lié aux raisons que tu viens d'énoncer.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

Lorsque j'extrais l'ADN à l'aide d'un kit (FastDNA kit), je dose (prenons l'exemple d'un tube, DO=0,127 d'où une concentration de 317,5µg/mL d'ADN). Je dépose sur un gel d'agarose 0,8% 5µL d'ADN + 2µL de bleu de charge.  [...] Pour moi tu as de l'ARN... En fait normalement tu as plus d'ARN que d'ADN dans ta cellule, donc il est normal que ta concentration soit plus elevee.  [...]

[Biochimie] cytokinine/auxine

Selon mon prof une forte concentration d'auxine stimule la caulogenèse alors que partt sur internet (notamment sur le site du CNRS) je vois. Une forte concentration d'auxine par rapport à celle de cytokinine stimule la formation de racines ou rhizogenèse tandis qu'un rapport faible entraîne au contraire la caulogenèse c'est-à-dire la formation de tiges.  [...] Je pense que ce qui est dit sur le site est vrai, car les teneurs en cytokinines par rapport à l'auxine peuvent orienter les néoformations d'organe, soit vers le bourgeonnement (caulogenèse qui consiste a la formation de bourgeons et de tiges) où la concentration de cytokinine est supérieur à la concentration en auxine, soit vers la rhizogenèse où la concentration d'auxine est supérieur a la concentration de cytokinine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Ensuite grâce aux cycles critiques des 4 génes que tu étudies tu peux retrouver grâce à la courbe la concentration initiale en ADN pour tes 4 gènes.  [...] Tu compares juste tes échantillons entre eux avec pour conclusion quelque chose du genre la concentration en ADN de tel échantillon est 10 fois plus élevée que dans celui-ci.  [...]