• Forum - Coloration, Nitrate d'argent, Spots

Révélation protéines au AgNO3

Voici ce que j'ai trouvé. Etant mille fois plus sensible que le bleu de coomassie, la coloration au nitrate d'argent permet de détecter des spots contenant 0,1 ng de protéines. Elle présente néanmoins certains inconvénients. la stSchiométrie de la coloration n'est pas totalement linéaire, la reproductibilité est difficile à obtenir et certaines protéines sont peu ou pas colorées par cette méthode.  [...] pour la linéarité. les colorations au nitrate d'argent sont sensibles, mais dépendent de la composition en acide aminés et donc ne sont pas linéaires. On ne peut pas utiliser cette méthode pour comparer des concentrations de protéines.  [...]

[Biochimie] gel 2D

j'ai commence a faire le gel bi-dimensionnel mais a chaque fois j'obtiens des stries dans le gel qui cachent les spots, en plus la coloration au nitrate donne un fond un peu fonce. avez vous des conseils qui pourraient améliorer mes gels et merci.  [...] Pour la coloration au nitrate d'argent, j'obtiens un fond du gel foncé uniquement dans la partie supérieure du gel, j'obtiens des sortes de stries qui cachent les spots, si je réduis le temps de développement des spots dans la partie inférieure ne vont pas apparaitre, sachant que j'ai fais une dialyse pour mon échantillon et c'est toujours la meme chose, le tampon d'extraction ne referme pas de tris, j'ai essaye d'éliminer toute trace de sels.  [...]

[Biochimie] coloration nitrate d'argent

Résultat intriguant aujourd'hui sur un gel de polyacrylamide... Apres coloration au nitrate d'argent, les protéines sont bien révélées et prennent une teinte marron, par contre une bande très particulière prends au contraire une coloration grise... je n'avais jamais vu ca avant.  [...] Comment se fait-il que ces spots (ou bandes) prennent une coloration grise ça je ne sais pas. Le nitrate se fixe sur les groupements carboxyliques et soufrés des chaines latérales. Peut être une histoire de composition en acides aminés et de concentration.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).   [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

Les puces à protéines

2- Sur chaque spot, on verse une multitude de protéine chelatantes auquelles on a attaché une substance qui émet de la lumière colorée (enzymes, anticorps etc..) et ceci de manière identique sur chaque spot (autrement dit si on a 50 protéines chelatantes différentes, chaque spot sera en précense de ces mêmes 50 protéines chelatantes).  [...] Du coup, pour les cancers, si on fait une comparaison entre les spots protéiques extirpés d'une cellule cancéreuse avec ceux d'une cellule saine, on pourra comparer les quantités des protéines présentes et celles qui st surexprimés ou sous-exprimés par la coloration seront celles à étudier pour le cancer.  [...]

[Immunologie] Test Elispot

Sur la plaque, on a une concentration en cellules (lymph T et B) décroissantes pour chaque ligne. Et pour chaque colonnne différentes concentrations en mitogènes ConA et LPS.   [...] nous avons prelevé à différents jour les surnageant de culture cellulaire de lymphocytes T et B. On a realisé elisa sur deux plaques, une anti Ig et une autre anti IL2. On a différentes concentration dans chaque colonne en mitogènes ConA et LPS.   [...]

danger des leds pour les yeux

Je connais la norme EN 62471 pour avoir déjà fait des mesures sur des spots et comparé les valeurs d'exposition aux seuils définis dans la norme, à la demande de clients fabriquant des spots à LEDs (pour usages professionnels).  [...] Résultat. même des spots en blanc froid (5700K), et très directifs -donc le cas le plus défavorable-, et sans diffuseur, ont été classés en groupe 0, sans risque, et avec une bonne marge.  [...]

Le SIDA, un sujet encore trop tabou

Merci de ta réponse miniju. Alors concernant Philadelphia, c'est un superbe film bien sûr, mais bon il est un peu accentué par rapport à la réalité des séropos aujourd'hui, notamment parce que la prise en charge médicale des patients a bien évoluée et qu'on peut bien maitriser l'évolution du virus.  [...] Merci de m'avoir repondu, dommage qu'on ne peut pas trouver la chanson en entiere car elle est vraiment geniale, les paroles sont tres touchantes. Il faut la commercialiser, et avec l'argent gagner, reverser au Sidaction par exemple.  [...]

[Biotechnologie] quantification des protéines

ils ont fait une electrophorese en 2D, ensuite ils ont autoradiographié le gel, ensuite ils disent qu'ils ont excisé les spots et qu'ils ont fait une scintillation liquide puis denombrement. d'autre part, ils disent qu'ils ont excisé d'autres spots et qu'ils ont analysé les acides aminés.  [...] L'autoradiographie permet de reveler les spots sur le gel 2D. Ils decoupent les spot et ils font une scintillation liquide pour quantifier (la radiactivite est proportionelle a la quantite de proteine), puis ils envoient la bande en MS ou edman pour avoir la sequence en AA.  [...]

[immunologie] Réaction antigène-anticorps

Chip (et non ship) est le terme anglais pour puce. Il existe des puces à ADN pour étudier les hybridations, des puces à protéines pour les interactions protéiques dont par exemple les interactions Ag/Ac. Sur une surface fonctionnalisée, l'Ag (pour cribler des Ac) ou des Ac pour indentifier des Ag sont liés chimiquement.   [...] Sur cette surface fonctionnalisée est ensuite envoyé l'échantillon à tester. Suivant le marquage (fluorescent souvent) et à l'aide d'une caméra de détection et d'un logiciel d'analyse d'image, il est possible de visualiser les spots qui réagissent...plusieurs milliers de spots peuvent être déposés sur une lame.  [...]