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[Biologie Moléculaire] PCR colonie et PCR ADN

Ce que je ferais, c'est une pcr sur la culture liquide (vous prenez genre 200uL, pcr sur le culot comme sur une colonie) en parallèle de la PCR sur miniprep. Ça vous dira déjà si la différence tient dans la miniprep. Peut être que le signal que vous avez est génomique (Vous avez beaucoup de clones positifs Peut être que ça recombine).  [...] On pensait que cela pouvait être génomique. Mais nous avons testé 3 inserts différents dans 3 plasmides, les 3 donnent un produit de PCR sur colonie (témoin positif sur insert qui confirme, témoin négatif sans ADN qui confirme). Et les 3 perdent leur insert après Miniprep de la culture liquide.  [...]

Densité bactérienne

Le nombre d'UFC correspond au nombre de cellules vivantes, il se calcule en étalant des dilutions d'une culture et en comptant le nombre de colonies sur chaque boite (1 colonie est issue d'1 cellule vivante de la culture liquide) et en faisant des moyennes.  [...] La densité optique, mesurée au spectrophotomètre, quantifie le nombre de bactérie dans la culture mais certaines cellules mortes sont comptées aussi.  [...]

[Microbiologie] Etat frais et encre de chine

Quand j'ouvre mon polycopié, je trouve que pour mettre en évidence la capsule d'une bactérie, on utilisé de l 'encre de chine à l'état frais, mais si on applique une coloration à l'état frais, ce n'est plus un état frais. Je veux dire, je ne sais même pas comment on peut dire cette phrase.   [...] Mais généralement, il s'agit de l'observation de bactéries vivantes non préparées (en culture liquide ou colonie) afin de déterminer des caractéristiques simples comme la forme individuelle (bacille, coque,...), le comportement de groupe (chainettes, diplo/tetracoques...) et la mobilité.  [...]

[Microbiologie] Problème de repiquage

rien ne pousse en milieu liquide. Ça marchais habituellement et soudainement impossible d'avoir une culture fraiche... Dois-je renouveler mon stock.  [...] Certaines personnes inoculent leur milieu liquide en prenant la colonie par l'intermédiaire d'un cône de micropipette et le jette dans le tube. Or desfois de l'anios mal essuyé sur la micropipette se retrouvent donc sur le cône, puis se dilue dans le milieu de culture, ce qui tuent les bactéries.  [...]

[Divers] Comment reproduire soi-même ses levures de boulanger?

Cependant, comme l'a déjà fait remarquer quelqu'un d'autre, beaucoup d'autres organismes (champignons et bactéries) se développent dans un tel milieu, et ils peuvent parfois être mauvais pour la santé. En particulier, la culture de levures dans un milieu liquide (eau sucrée par exemple) est rapidement contaminée par d'autres choses.  [...] La colonie ne va pas s'épuiser mais c'est le milieu. Dans de nombreux labos des personnes change le milieu de culture (liquide sucré pour toi) tous les jours, cela dépend de ce qui pousse et les conditions. Pour toi, comme tu dilues à chaque fois un peu de ta culture initiale dans une nouvelle bouteille, tes levures se disent super il y a de la palce, et se multiplient.  [...]

Microbiologie

quand on veut isoler une colonie pure parmi plusieurs espèces qui se sont dévéloppées sur un milieu, on passe par un milieu non sélectif ce que je ne comprends pas.  [...] De toute maniere, dans l'absolu une colonie est pure... je pense que c'est ce qui est sous entendu. Si ta colonie sur boite (selective ou non) est bien isolée des autres, il y a de forte chance pour qu'elle soit issue d'une seule bacterie est donc qu'elle soit pure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Après 1 nuit à 37 °C normalement, ça pousse généralement bien E.coli. Mais dans ce cas, j'ai du attendre 1 jour et demi pour avoir une culture trouble. J'ai réalisé l'extraction avec le kit de promega SV wizard minipreps.  [...] Ce qui me semble étrange, c'est que si l'ampicilline était vraiment inactif, j'aurai du obtenir beaucoup plus de colonies sur mes plaques de contrôles et de transformation (en moyenne 40 colonies obtenues). Mais j'ai vraiment du mal à comprendre comment c'est possible d'avoir les colonies blanches et de n'avoir aucun ADN plasmidique sur le gel ensuite.  [...]

[Microbiologie] Méthode ensemencement

Quand tu as une colonie bactérienne, tu la grattes avec l'anse ou la pipette pasteur. Puis tu resuspends dans le tube de milieu liquide correspondant.  [...] - Pour l'ensemencement, tu peux même utiliser des cures dents ou tout le matériel que te propose MaliciaR. tu piques ta colonie (juste une seule fois) bien isolée et ensuite tu trempes l'extrémité de ton anse dans le liquide, tu l'agites pour décoller les cellules et ensuite tu mets ton milieu liquide ensemencée dans un étuve qui agite à 37°C.  [...]

[Microbiologie] Préparation suspension à 10^6 bactéries/mL

J'aimerai préparer une suspension bactérienne à une concentration d'environ 10^6 ou 7 bactéries/mL, à partir d'une culture solide sur boîte de pétri. Pour cela, je n'aurai pas de solution de McFarland à disposition, ni de bouillon nutritif. Est-ce possible de le faire dans de l'eau physiologique à partir d'une suspension dense.  [...] On m'a appris qu'une colonie = 10^6 bactéries environs. Donc je serais toi, je prélèverai une colonie que je resuspendrai dans le milieu liquide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de tranformation

Et la encore, après toute les vérification, j'ai des colonies sur ma boite (bcp de blanche et quelques bleus), mais aucune ne pousse lorsque je passe en milieu liquide (LBamp). Le plus intrigant, c'est que j'ai tenté de repiqué une bleu dans mon LB amp liquide, et là ça pousse nickel.  [...] Ce qui expliquerai qu'elles ne poussent plus en milieu liquide + AMP. C'est pour moi l'explication la plus plausible vu que la seule colonie qui ai poussé en LBAMP liquide est ma TOPO bleu, donc ayant encore le plasmide.  [...]