• Forum - Clonage, Expression, Promoteur

[Génétique] Qu'est-ce qu'un clone provenant d'un YAC?

Je te rassure, je n'ai pas plus compris que toi le principe du YAC, je crois que l'essentiel est de le voir comme un plasmide ( attention, je n'ai pas dit que c'était un plasmide, je dis juste que pour la compréhension, c'est plus simple ) qui apporte l'insert en question, le gene que tu souhaites cloner.   [...] Oui exactement, les Yacs fournissent une alternative aux systèmes bactériens pour le clonage ou l'expression de gènes eucaryotes. Ils peuvent véhiculer de grands gènes eucaryotes, avec promoteur(s) et séquences de contrôle, et conviennent donc pour étudier les fonctions des gènes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

ce trimestre on fait un projet de clonage du gen-gfp dans pcDNA3.1 et calculer l expression du transgene le gfp gen doit etre apres le CMV promoteur. on doit faire une strategie de clonage ( on est a 7 en groupe) chaqu un doit pense a une strategie et apres on va comparer les resultats.  [...] comme controle de lexpression in vitro (dans 3T3 cellules) il faut construire le suivant. clonez le gfp gen dans le plasmide pcDNA3.1 apres le CMV promoteur. c est un promoteur virale qui est actif dans toutes les cellules eukaryotes. controlez avec les enzymes de restrictions le nouveau plasmide. pcDNA3.1-GFP.  [...]

[Biologie Moléculaire] renseignement

pour une bactérie le promoteur se situe dans les régions -35 et -10.  [...] il faut donc prendre que la partie au niveau du codon start (ATG) jusqu'au codon stop, et donc on insère cette partie soit dans un vecteur de clonage pour cloner la région ou dans un vecteur d'expression juste après le promoteur du vecteur pour exprimer le gène.  [...]

[Biotechnologie] Composants d'un vecteur d'expression eucaryote

Merci mais je sais comment ça fonctionne. C'est un vecteur d'expression donc pourquoi vouloir un promoteur et pas de site polyA.  [...] Et sinon, on peut parfois trouver un intron dans certains vecteurs d'expression (entre le promoteur et le gène), je crois que ça augmente la capacité d'expression. Mais je ne crois pas que ce soit nécessaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions sur clonage

2/Comment peut-on obtenir une forte expression des gènes insérés dans un vecteur de clonage est ce en insérant plusieurs fragments.  [...] 2/si vous voulez obtenir une forte expression du gène il suffit de mettre un promoteur a forte expression (pCMV (promoteur du cytomegalo virus) par exemple).  [...]

système Cre-ER(T2)

Tout n'est qu'une question de promoteur. En plus claire, le promoteur qui sera utilisé pour conduire l'expression de ta fusion Cre-ER peut etre constitutif, dans ce cas Cre-ER sera exprimé dans tous les tissus mais défloxera que si l'animal recoit l'agoniste de ER.  [...] ou bien le promoteur est tissu-spécifique et c'est là ou les choses se compliquent car en réalité il faut parler de promoteur tissu-sélectif et non plus de tissu-spécificité. En plus claire, un promoteur qui est censé entrainé l'expression du transgene dans le muscle squelettique uniquement (car c'est ce qu'il fait naturellement lorsqu'il est dans le genome à son locus), présentera des fuites transcriptionelles plus ou moins négligeable cad suivit ou non de la synthese de Cre-ER (ou de tout autre transgene).  [...]

[Biologie Cellulaire] Receptor Binding Domain dans une experience de signalisation cellulaire

Une des expériences de l'article, visant à demontrer que l'expression de FT est induite directement depuis les feuilles, est basée sur l'utilisation du Receptor Binding Domain du glucocorticoide du rat... j'avoue avoir du mal à comprendre exactement comment cela fonctionne.  [...] En fait c'est simple quand on connait le truc, ils ont utilisé pour exprimer leur gène un promoteur inductible et non un promoteur constitutif (genre 35 S). Le promoteur est inductible à la dexaméthazone (DEX. corticoïde), donc pour induire l'expression de ton gène il faut activer le promoteur par du DEX.  [...]

[Biotechnologie] Induction vs. expression

Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.  [...] Si j'ai une souche ne portant pas de système d'expression dépendant de l'induction à l'IPTG, c'est mal barré Puis, faut aussi voir que dans la souche d'expression en question l'IPTG doit induire préférentiellement le promoteur dont est dépendant le gène d'intérêt.  [...]

Expression d'un gène

Je suis désolée, je suis un peu perdue avec le mot expression... si vous pouviez m'éclaircir un peu sur le sujet, cela serai vraiment gentil de votre part.  [...] Certains gènes sont exprimés continuellement au même taux, d'autres voient ce taux varier (ex. les protéines de choc, hsp). Ces derniers sont exprimés très faiblement en temps normal, et en cas de choc, le promoteur sera activé par un facteur qui permettra une expression très amplifiée.  [...]

Différence shARN, miARN et siARN

mais je ne vois pas le lien entre la pol. de l'Aquaporine et celle du sh, a moins que tu parles d'exprimer un sh sous le contrôle du promoteur de l'aquaporine Il n'y a pas de raison que ça ne soit pas possible, j'ai juste eu quelques lectures précisant que l'expression d'un sh est plus performante avec un promoteur polIII que polII (mais ça fonctionne avec un promoteur polII, comme le CMV par exemple, donc pas de raison).  [...] Petite précision (après quelles lectures rapides également). apparemment, on utilise de moins en moins des promoteurs Pol III, qui permettent une expression continue, car l'excès de shRNA a des effets cytotoxiques.  [...]