• Forum - Clonage, Enzymes, Restriction

[Biologie Moléculaire] Beta galactosidase chez Saccharomyces cerevisiae

Autre question à l'épreuve des balles. t'es certain que ton gene beta gal est bien intégré et qu'il est en phase Pas une petite délétion due aux enzymes de restriction durant le clonage La même question vaut d'ailleurs pour ta construction. Ton récepteur est bien synthétisé, y a pas de souci de phase.  [...] Autre question à l'épreuve des balles. t'es certain que ton gene beta gal est bien intégré et qu'il est en phase Pas une petite délétion due aux enzymes de restriction durant le clonage.  [...]

[Génétique] Clonage animal (question)

utilise-t-on des enzymes de restriction ou des plasmides pour cloner un animal ou encore pour faire du clonage thérapeutique.  [...] Pour le clonage thérapeutique, là, oui, il va falloir des enzymes de restriction et des plasmides pour sélectionner des gènes, les cloner, les introduire dans une cellule hôte, etc.  [...]

fusion transcriptionnelle et traductionnelle

la fusion traductionnelle est une fusion de gênes effectuée dans leur partie codante et respectant les cadres de lectures. Permet d'obtenir une protéine chimère. cette technique permet par exemple de faire une fusion entre un gène d'intérêt ( qui code pour une protéine d'intérêt ) et le gène qui code pour la GFP.   [...] les 2 types de fusions peuvent se réaliser par PCR ou par clonage classique avec enzymes de restriction,  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment extraire un gène??

Durant ma révision de Bio-Mol, je me suis posée une question sur la méthode de clonage des gène et le choix des enzymes de réstriction.  [...] Si tu n'as pas d'autres infos, alors la seule chose est de tester differentes enzymes. Si le génome est AT riche alors prendre une enzyme qui a un site GC riche, il sera moins fréquent tu auras donc plus de chance de cloner ton gene intact.  [...]

Purification Séphacryl S-400

Cela fait quelques années que je purifie mes produits de PCR à l'aide d'une petite colonne en séphacryl S-400 (fabrication maison.), en vue de les sous-cloner dans des plasmides d'entrée pour du clonage GatewayTM, entre autre.  [...] J'aurais voulu savoir si le séphacryl S-400 permettait d'éliminer efficacement la Taq pol, car actuellement je voudrais faire du clonage par restriction/ligation. Je sais que la taq pol peut être gênante après digestion des fragments PCR par des enzymes de restriction, puisque les résidus de Taq pol viendraient potentiellement compléter les extrémités collantes.  [...]

[Génétique] Obtention de sonde plasmide

2) Je ne trouve aucun enzyme de restriction qui corresponde entre mon ARNm et les différents vecteur de clonage disponible sur le marché. Comment faire Selon mon prof c'est très simple (pour lui tout est simple) il suffit juste de choisir un plasmide et deux enzymes de restriction au pif, et de rajouter les nucleotides correspondant aux 2 bout de ma sonde. Comment je fais ca moi.  [...] 2. TA ou GC cloning ne nécessitent pas d'avoir des sites de restrictions interessants dans l'insert. Si vous ne voulez pas utiliser ces solutions, pensez à la PCR.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Concernant les différents types de clonages, celà dépend effectivement de la stratégie adopter pour le clonage via le choix des enzymes de restriction.  [...] On digerait alors le plasmide et l'insert par des enzymes différentes A et B générant des sites de restriction non compatibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Quelques petites questions. Tu as déja réussi des clonages avec ces enzymes de restriction, avec cette ligase, dans les même conditions Il y a des problèmes de clonage également autour de toi Quand tu purifies tes bandes sur gel, tu dois faire ça sous une lampe UV.  [...] Pour le clonage 1. oui j'ai testé over night, pendant 1h, 20 min (avec le tampon 2X ultra rapide soit disant)... pour la durée, j'ai tout testé. Les enzymes ne me paraissent pas trop rares, surtout XhoI avec laquelle j'ai déjà fait un clonage.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]