• Forum - Choc, Thermique, Vitesse, Bactéries

[Biochimie] Problème de transformation

en suite pour la transfo i let possible que toute mes cellule soit morte pendant le choc thermique en effet peu etre devrai je attendre 45s au lieu de 90s.  [...] Je ne pense franchement pas que ca ait la moindre influence. le choc thermique est important. si tu diminues la vitesse, tes bactéries n'auront même pas le temps d'être transformées.. et 42°C, pour E. coli, ca n'est pas optimal, mais c'est pas non plus comme si tu les laissais une heure à 60°C, ca ne va certainement pas les tuer.  [...]

[Génétique] Mutation par ajout d'adn: qu'est-ce qui se passe vraiment?

Salut. non il n'y a pas de mutations du gène, en fait la bactérie en présence de ces séquences d'ADN va être transformée. elle va absorber le gène try+ et l'intégrer à son génome pour pouvoir ainsi produire du tryptophane. Pour cela il est généralement nécessaire de créer un choc thermique.  [...] Certaines especes sont capables d'incorporer naturellement de l'ADN, meme en absence de choc thermique (d'ailleur le choc thermique ne marche que si les bactéries ont été préparées au préalable).  [...]

[Biotechnologie] La post-acidification du yaourt

- choc thermique (58°C - 5min) pour endormir les bactéries lactiques.  [...] - réduction de l'effet tampon de la poudre de lait (afin d'atteindre le pH d'inhibation des bactéries lactiques plus rapidement).  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Le protocole est assez classique. transformation de bactéries avec 5ng de plasmide par choc thermique et sélection sur pétrie avec d'ampicilline.  [...] Dans ce cas, si la production a déjà marché avec le même plasmide et la même souche bactérienne, le mieux est de refaire tous vos tampons, les stocks d'antibio t d'IPTG... et de recommencer. Si un tampon a été mal fait, ça ira plus vite de refaire des nouveaux tampons que de trouver l'erreur.  [...]

[Microbiologie] Quelques questions en micro

Oui étant donné que ce qui fait la grosseur d'une colonie est le nombre de bactéries. Une colonie plus grosse aura donc eu une activité prolifératrice plus élevée qu'une colonie plus petite (temps de doublement plus faible, résistance à un milieu sélectif, avantage par rapport à une compétition trophique sur la gélose,  [...] 2e. Éviter un choc thermique aux bactéries et ainsi permettre une meilleure croissance (c'est particulierement vrai pour les bacteries plus fastidieuse.. mais plus ou moin nécessaire les les ubiquitaires qui pousse sur tout.. genre du staph ou du strep ou du e.coli).  [...]

Expériences en génétique…

Oui alors là je crois qu'il y a effectivement quelques confusions. Si tu veux transformer une bactos rendu compétente (par du Ca2+ et non pas par du Na+), tu as plusieurs possibilités dont le choc thermique (celle que j'utilise habituellement) qui consite en un passage d'environ 45 secondes à 42°C, ou également la lipofection, l'électroporation, etc.  [...] En biologie moléculaire, on utilise ces plasmides pour intégrer des morceaux d'ADN dans des bactéries rendues compétentes, c'est-à-dire perméables, l'ADN rentre tout seul dedans grâce à un choc électrique ou un choc thermique.  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

D'apres ce que tu as décris, il me semble que tu essayes de transformer les bactéries avec seulement le produit de PCR et que tu ne mets pas le plasmide. Ce dernier, qui doit surement contenir un gène de résistance aux antibiotiques, ne peut donc pas empêcher les bactéries de mourir au contact du milieu LB+ampicilline.  [...] A ne pas négliger, le fait que tu es choisi d'autres bactéries que celle du kit. Sont-elles compétentes pour une transformation par choc thermique Est-ce les mêmes que celles utilisées pour les clonages qui ont fonctionné précédemment.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage TOPO dans JM-109

J'ai effectué la ligation dans le vecteur topo pCR®2.1 et la transformation dans des bacteries compétentes JM-109 (via choc thermique).  [...] le protocole c'est du grand classique ligation (vecteur+insert (purification)+solution de sel). 15 min à température ambiante. Puis transformation avec choc thermique (45 sec à 42°C).  [...]

transfo de levure

question sur la transfo de levures...Faut il placer les levures dans la glace après les avoir laisser qq minute à 42°c pour créer un choc thermique comme pour les bactéries chemically competent ou n'est ce pas la peine.  [...] Non ca n'est pas utile, tu centrifuges rapidement, puis tu retires le PEG/Liac, tu resuspend dans le milieu adequate et tu etales sur tes boites de selection.   [...]

isolation d'un plasmide

De plus, lorsqu'on veut transformer une bactérie, vaut il mieux donner un légr choc thermique et une source chimique pour faciliter l'incorporation du plasmide.  [...] Pour les transformations, les deux sont possibles et en pratique c'est selon les bactéries dont on dispose. Maintenant je crois que le plus courant est d'avoir des bactéries que l'on soumet à un choc thermique.  [...]