• Forum - Cellules, Vecteur, Protéine, Fusion

[Génétique] Transfection

je voudrais savoir si les cellules transfectées transitoirement par un vecteur codant la proteine de fusion c-Myc-GFP expriment toujours la proteine c-Myc endogène.  [...] La fusion à la GFP permet juste de suivre t'as prot d'interet (myc). Donc la myc s'exprime mais l'expression ou le suivis (tout depend du but de la fusion) est rapporté par la GFP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gfp

Quelqu'un saurait-il me dire s'il est possible d'effectuer une transfection à l'aide d'un vecteur contenant uniquement le gène GFP (ou autre prot fluorescente), çàd sans l'utiliser en protéine de fusion Mon but est de suivre un clone cellulaire que j'utilise en coculture (comme cellules nourricières) avec un autre type cellulaire et à la fin de la manip j'ai une étape de lavage pour me débarrasser de mes cellules nourricières, mais j'aimerai un système me permettant de quantifier ou en tout cas de visualiser ces dernières.  [...] oui c'est tout a fait possible, il existe plein de constructions, adénovirus ou autres permettant l'expression de GFP dans des cellules eucaryotes.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Pour produire cette proteine de fusion dans les cellules de souris, il faut donc assembler un ADN recombinant puis de l'insérer dans un plasmide (ou vecteur ) d'expression permettant la transcription puis la traduction dans les cellules. Au préalable, afin de disposer de suffisamment de vecteur pour les cellules de souris, il est necessaire d'amplifier le vecteur dans le collibacille.  [...] On me demande de présenter les caractéristique generales de ce type de vecteur pour permettre son amplification dans le colibacille puis l'expression de notre proteine recombinante dans les cellules de souris.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

les protéines de fusion permettent de neutraliser l'activité d'une cellule en réduisant ses capacités de prolifération, et dans le cas des cellules cancereuses c'est très important et ce qu'on veut avoir.  [...] Merci de votre réponse mais je ne comprend pas très bien. les protéines de fusion limitent la prolifération des cellules toutes les cellules ou uniquement les cellules cancéreuses.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus.  [...] Si l'écotine se dimérise, il suffit de faire un seul vecteur avec un gène fusionnant écotine et proinsuline, et la dimérisation de cette protéine de fusion se fera spontanément via le domaine écotine.  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

L'IPTG est utilisée notement en biotechnologie dans les cas de productions de protéines recombinantes par un vecteur d'expression que l'on fabriquera avec un gène d'une protéine fusion (le gène lacZ ds ce cas ci) qui permettra une lecture du gène controlée et donc une production controlée de la protéine cible.  [...] Donc dans l'ordre, tu clones ton gène recombinant dans ton vecteur, tu transformes une cellule de E. coli avec ton vecteur, tu la fait pousser sur un milieu contenant un antibiotique, du X-gal et de l'IPTG. Si la colonie devient bleue, c'est que le vecteur se trouve dans la cellule, mais que le gène LacZ est intact, donc l'insertion du gène recombinant n'a pas fonctionné.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace. On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace.  [...] On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion. la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent Clonage

C'est pas détaillé mais il manque encore des infos. nature/taille de l'insert y a-t-il des sites de restriction pour le sortir de l'ancien vecteur faut-il cloner en phase avec quelque chose (Tag, protéine de fusion).  [...] 2 de nucléotides (acides aminés = protéine...), autour de 20, plus la partie qui contient le site de restriction, plus quelques uns pour permettre la bonne digestion par l'enzyme. une trentaine en tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

Tu pourrais donc voir si l'acidification de tes cellules qui expriment encore ta proteine de fusion a les memes consequences. Quand tu aurra trouvé vraiment à quoi c'est du, je serai curieux de le savoir.  [...] EN revanche, les cellules exprimant le transgène recouvrent une résistance comparable à celles des sauvages. Bizarrement, la perte de fluorescence ne s'accompagne pas d'une perte de résistance. Ce qui me fait dire que seul le GFP serait altéré. Mais il est en fusion avec le gène codant ma protéine.  [...]

Interaction cellule/virus

Ou sinon tu construits une protéine de fusion GST/glycoprotéine virale et tu fais un pull down classique sur un un lysat membranaire des cellules sensibles pour voir si tu descends bien ton récepteur cellulaire... T'as pas forcément besoin d'une interaction avec la cellule entière...non.  [...] C'est simple de construire une protéine de fusion Je peux envisager la construction avec le recpeteur cellulaire, mais je ne suis pas sure d'en connaitre assez sur lui.  [...]