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[Biologie Moléculaire] souris sv129

je souhaiterai savoir si les cellules de souris sv129 possedent l'antigene t de sv40 j'ai en effet vu lors de mon stage qu'il était possible de transfecter des.  [...] cellules eucaryotes avec un plasmide bacterien qui comporte le sequence sv40 ORI. jignorait jusque là qu un plasmide pouvait s'exprimer dans des cellules eucaryotes. je me demandais donc si c'etait pour cette raison (pour pouvoir faire des transfections)que les souris utilisées étaient issues de croisement entre souris sv129 et B6.  [...]

Co-immunoprécipitation: à quoi sert le flowthrough?

Bonjour, j'ai récemment effectué un stage où j'ai fais une co-immunoprécipitation avec des billes magnétiques, sur des cellules lysées. Avant d'éluer les complexes billes -anticorps-antigènes, on a placé les tubes sur le support aimanté pour récupérer le surnageant que mon maître de stage a appelé flow through.  [...] Le flow through est censé ne contenir que les autres protéines cellulaires dont je n'ai pas besoin Si la co-pi a fonctionné je ne devrais rien avoir dessus au WB (ou montrerait les restes de protéines d'intérêt n'ayant pas lié) Cela sert à savoir si la liaison entre l'anticorps et la protéine est bonne ou mauvaise.  [...]

[Biologie Cellulaire] Histologie. Coupes flottantes

Actuellement en stage de neurosciences, je travaille sur la souris à des stades très précoces (entre les jours post-nataux P1 et P20).  [...] Je travaille sur coupes flottantes (50 microns) et j'ai de grosses difficultés à mettre sur lames les coupes de cerveaux des souris les plus jeunes (P1 à P7). Le tampon que j'utilise pour mes rinçages est le PBS1X-triton 0,1%. (Je fais des marquages en fluorescence et en visible. DAB).  [...]

[Divers] 13.5dpc?

dpc signifie day post coitum. En francais on dirait jours après l'accouplement (par extension on dit aussi fécondation en admettant qu'elle se fasse bien immédiatement après l'accouplement).   [...] Le plus souvent on lit le sigle E13.5 (par exemple) ce qui signifie embryonic day. C'est plus précis parce que cela ne correspond pas à une durée mais à un stade de développement embryonnaire. Quand on veut être très précis, pour les stades précoces du développement on préferera parler en nombre somites.   [...]

[Biologie Cellulaire] Problème test MTT et différenciation

Je suis acutellement en stage dans un laboratoire de toxicologie cellulaire, dans lequel je test des molécules sur des cellules hépatiques. lignée HepG2, et sur des cellules neuronales non différenciées. lignée SK-N-BE(2).  [...] Pour savoir si les molécules testées sont toxiques ou non sur mes cellules, je réalise un test MTT. Cependant je perd à chaque fois que je retire mon réactif MTT des cristaux bleus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Normalement oui tu mettre des plasmides dans des cellules eucaryotes puisque quand j'étais en stage on avait transplanté des plasmide à l'intérieur de cellules cancéreuse. Il s'uffit de faire une électroporation ou autre manipulation du genre pour qu'il soit intégré.  [...] Cet antigène permet au plasmide d'être répliqué par la cellule, et donc d'être conservé pendant une période plus longue. Sauf exception, la présence de cet antigène est absolument nécessaire dans les cellules de mammifères pour qu'il y ait réplication d'un plasmide.  [...]

[Immunologie] Marquage immunofluorescence

Ensuite maintenant vu les reponses que j'ai eu j'ai un doute sur le co-marquage est ce que il s'agit de localiser 2 proteines cellules... avec 2 anti corps diff ou il s'agit d'un marquage indirect 1 anti anti corps qui se fixe sur un anti coprs primaire qui lui est fixé a la cible.  [...] Au cours d'un stage en laboratoire, je me suis familiarisée avec la technique de l'immunofluorescence. Une fois les marquages effectués sur mes cellules, je les ai observées au microscope à immertion (Leica). Pour pouvoir les observer, on m'a dit d'ensemencer mes cellules sur les lamelles de verre.  [...]

[Biologie Cellulaire] protocole d'adhesion cellulaire

je suis en stage dans un labo de cosmétologie et je dois faire un protocole d'adhésion cellulaire sur des cellules de l'épiderme.  [...] je dois stimuler les cellules avec des agents d'intérêt pour savoir si cela agit sur l'adhésion. le souci c'est que ces stimulations doivent durer au moins 24 h avant de récupérer les cellules pour les tester sur le kit d'adhésion. comment je peux récupérer les cellules sans endommager la membrane et surtout les protéines membranaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème de taille

Il faudrait que je trouve la taille d'une cellule (HCT-8 et MDCK) or le fournisseur ne spécifie pas la taille de ses types cellulaires.  [...] Pour les MDCK. pour les cellules MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) utilisées durant le stage, dont le diamètre est de 10 µm [Petitjean (2007)].  [...]

[Biochimie] Analyse cycle celluaire cytometrie de flux sur l'automate cyan

Bonjour à tous et à toutes, je suis nouvelle sur ce forum et j'espère que je trouverais des âmes bien veillantes pour m'aider avec ce petit soucis.   [...] J'ai réalisé lors de mon stage plusiurs manipulations de marquage avec Ac fluorescent pour la technique de cytométrie de flux.Seulement j'ai également effectué à la fin de mon stage un cycle cellulaire sur des cellules en utilisant comme intercalant ADN le vybrant violet.  [...]