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[Biologie Cellulaire] ultracentrifugation et cellules!

je voudrais réaliser des ultracentrifugations différentielles afin de déterminer la localisation d'une protéine spécifique qui m'intéresse. mais au lieu de le faire sur tissu, j'aimerais le faire à partir de culture de HEK. Auriez vous une idée du nombre de cellules dont j'ai besoin pour avoir au final une quantité de proteine suffisante pour faire des western.  [...] Tout dépend du compartiment cellulaire que tu veux isoler, de la représentation de ta protéine dans ce compartiment...Donc c'est par l'expérience que tu sauras quelle quantité de cellule te permet d'avoir une bande convenable en western. Pour commencer tu peux essayer plusieurs conditions où tu auras mis un nombre croissant de cellules.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'actine est, bien entendu, une protéine ubiquitaire dont on estime que les différents traitements appliqués aux cellules ne vont pas modifier la concentration. Ainsi, on s'en sert pour certifier que l'on a bien déposer la même quantité globale de protéine dans les deux puits (contrôle et expérimental).  [...] Concernant la quantité de PCNA j'avoue que là aussi je ne sais pas. Nous savons juste par l'énoncé que c'est une protéine chez l'humain qui est ubiquitiné quand il y a un stress. Peut-être que ces cellules contiennent naturellement autant de PCNA...car je ne pense pas qu'ils en ait rajouté dans les cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Polyribosomes

Quand on parle de polycistronicité, on se réfère au gène et/ou au messager. En effet les messagers eucaryotes sont monocystroniques et donc effectivement produisent un type de protéines.  [...] Le polysome est formeé dans les cellules eucaryotes pour produire une quantité suffisante de la même protéine dans un moins de temps.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

En d'autres mots et via un exemple, est-il possible de copier un anticorps monoclonal si l'on ne dipose pas de cellules productrices (mais bien de la protéine/anticorps en question et en quantité suffisante).  [...] (1) Mais suffit-il de tester quelques insertions de telles séquences dans des cellules productrices pour espérer que l'une d'entre elles reproduise la protéine désirée.  [...]

[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Est ce qu'il y a un rapport entre la quantité d'ADN que l'on transfecte et le taux de protéine exprimé au sein des cellules.  [...] Ca me paraît difficile de faire une règle générale. Ca doit déjà dépendre de ce que tu appelles ADN (un plasmide j'imagine), du promoteur, des conditions... Je pense que la seule façon de le savoir est d'essayer.   [...]

[Biochimie] protéine permettant de normaliser un western blot

Je travaille actuellement à quantifier des protéines sur western blot et pour celà j'ai besoin d'une protéine me permettant de normaliser... J'ai utilisée l'actine (il y en a probablement la même quantité dans outes les cellules mais mes résultats me semblent un peu érronné je voudrais donc savoir si quelqu'un utilise un normalisateur d'equerre pour ce genre de manip.  [...] je détecte une protéine du cytosquelette plus particulièrement du sarcomère. la calpaine 3, et ce que je crains c'est la variabilité de cette actine en tant que normalisateur, je ne peux pas non plus utiliser comme toi erk total ça ne s'appliquerait pas à la calpaine 3, je vais tester labéta caténine et la desmine. Merci.  [...]

[Biologie Cellulaire] Proteine des membranes plasmiques

J'aimerais savoir la quantité de protéine est plus élevée au niveau des organites cellulaires.  [...] Si vous prenez par exemple la membrane interne d'une mitochondrie, elle assure la production d'énergie, ce qui necessite des protéines ( ATPase...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] Sinon, attention, le ratio que j'ai indiqué est determiné pour un lysat cellulaire. Donc une mixture complète protéique dont on ne sait pas trop de quoi c'est composé. Il est possible de calculer le ratio quantité SDS/quantité protéine (si la protéine est purifiée par exemple).  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Salut, voilà un petit protocole rapide pour l'extraction des protéines. Attention, vu que tu n'as pas précisé quel est le type de cellules que tu utilises, je te donne celui que j'utilise. extraction de protéines à partir de cellules de mammifères Hela (marche avec pleins d'autres types cellulaires bien évidemment).  [...] Mais ca n'a absolument rien à voir avec l'automatisation. Si l'ensemencement des cellules est bien fait il n'y aura aucune différence en western point final. C'est la multiplication des étapes qui introduit des erreurs. Lorsque tu fais une manipe dans laquelle les cellules ne prolifèrent pas à la même vitesse, ou lorsque la quantité de protéine est rédibitoire car pouvant entrainer des saturation etc.  [...]

relation entre nombre de cellules \quantité de protéines

Telle que je lis votre question je comprends. si j'ai 10 n cellules qui donnent 1mg de protéines, combien aurais-je de protéines si j'ai k10 n cellules. La question est sans intérêt.  [...] Maintenant vous ne parlez sans doute pas de nombre de cellules à densité égale, mais sans doute de la quantité de protéines en fonction de la confluence. N'est ce pas.  [...]