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[Immunologie] Méthanol et marquage extracellulaire

j'essaye de faire un marquage intracellulaire de phospho Stat5sur des cellules T (souris). Le protocole implique le marquage extracellulaire classique (marqueur CD4, CD25), la phase de fixation puis perméabilisation utilisant PFA et méthanol.  [...] Mais en utilisant le méthanol, je perds tous mes marquages extracellulaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] séparation au ficoll

je souhaite séparer au ficoll les PBL de souris et je voudrai savoir si le protocole de séparation utilisé habituellement sur les PBL humain est applicable sur ceux de la souris. on m'a dit qu'il se peut que ça ne marche pas à cause de la diférence de dencité. es ce que qlq un a déja fait ça.  [...] J'en fais sur des cellules humaines de sang de cordon mais je ne sais pas si cela change beaucoup au niveau du protocole pour les souris.  [...]

greffe de cellules INS-1 chez souris swiss nudes

Dans le cadre de ma thèse, j'ai besoin d'utiliser des souris greffées avec des cellules INS-1 (insulinome de rat). J'ai élaborer un protocole à partir de quelques publis (notamment celle là. H. Gao et al. 2011, Mol. Pharmaceutics, 8.1775-1782). En gros je greffe 5.  [...] Pour avoir une sécrétion glucodépendante, il faut que tes cellules voient le glucose. C'est peut être le problème. Pourquoi ne pas essayer une injection portale ou dans la capsule rénale.  [...]

[Biochimie] Comment éliminer un marquage immunocytochimique?

J'ai des cellules fixé et marquée avec des anticorps primaire souris/chèvre et secondaire fluo (488 et 555) pour deux marqueurs membranaires. Je dois les traiter de manière à dénaturer leur ADN (j'ai un protocole impliquant triton et HCl à 1N) pour en marquer des modifications.  [...] Voilà j'ai pas foule d'idées (on m'a proposé des traitements UV ou micro-onde, mais pour garder l'ADN un peu intact y'a mieux^^), hésitez pas à faire des propositions.   [...]

Une expérience de transgénèse chez la souris

On injecte dans le noyau des cellules oeufs de souris (mammifères) le gène GFP, quelques cellules oeufs se développent et donnent des souris transgéniques capables d'émettre une fluorescence verte en présence d'ultra violets.  [...] ca me parait un peu surprenant il manque des info selon moi, ou sinon c'est pour avoir un schéma de protocole général j'ai envie de dire. en gros une des possibilité c'est que tu prélève des blastomères de souris tu réalise sur ces cellules une transgenèse de remplacement c'est à dire que tu remplace la séquence codant pour ta protéine d'interet par une séquence codant pour la GFP (par recombinaison homologue).  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Merci pour les protocoles. C'est tres gentil. Mais pour les lysats, je ne parlais pas de cellules en culture, mais de fragment d'organes. Il s agit du foie de souris. As tu un protocole.  [...] oui, je me ferai aider. Mais avant j ai quand meme besoin d un protocole.Le probleme c'est que je pars de rien. Dans le labo, ils ont dosè d autres proteines, pas celles la. De plus, ils le font souvent sur des cellules en culture. Cest pour cela que je suis un peu perdue. J'attens ton message demain.  [...]

caryotype

est-ce que quelqu'un aurai un protocole clair et qui marche. une autre question, est-ce qu'il faut ajouter du milieu de montage et peut on mettre du dapi.  [...] Voici le protocole utilisé en TP de Marqueurs moléculaires et techniques biologiques pour réaliser un caryotype sur des cellules de souris.  [...]

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères.  [...] Je suis à la recherche d'un protocole efficace d'électroporation de cellules de mammifères (plus particulièrement des cellules de type murine C2C12).  [...]

[Biologie Cellulaire] cultures cellulaires primaires

Ensuite, un schéma de protocole de culture, ce n'est pas assez précis. Cela dépend encore des cellules, certaines sont adhérentes d'autres surnageantes par exemple et pour chacun de ces cas le protocole sera différent.  [...] C'est à dire que oui, j'en fais tous les jours de la culture primaire de cellules humaines. Après, le protocole de culture ne varie pas par rapport à la culture de lignées.  [...]

[Biotechnologie] Culture cellulaire animale

Nous sommes trois merveilleux étudiants et nous sommes à la recherche d'un protocole pour tester les effets potentiels anti-cancéreux d'un phytomolécule sur une lignée de cellules cancéreuses animales. En somme, il ne nous faut que la technique d'exposition du produit ainsi que la concentration.  [...] Alors voila le probleme. le travail a faire est theorique, il ne faut qu'adapter un protocole deja existant a notre problematique. Nous avons un extrait de plante (california poppy), cependant on sait deja que cette plante n'a aucun effet anti cancereux. Les cellules utilisées sont celles qu'on veut, ca na pas bcp d'importance ( nous avons choisi des cellules cancereuses pulmonaires).  [...]