• Forum - Cellules, Primaires, Cultures

[Biologie Cellulaire] cultures cellulaires primaires

Si tu ne précises pas un minimum ta question, personne ne pourra te répondre. Quels réactifs utilises-tu pour faire tes cultures primaires Car selon les types cellulaires, la composition du milieu change.  [...] Les besoins varient en fonction des cellules. De plus, certaines cellules, en particulier les cultures primaires, ont parfois besoin d'un substrat pour adhérer (collagène, fibronectine,...).  [...]

Culture de cellules primaires et lignées cellulaires

Mais concernant les cellules primaires, il s'agit de cultures de cellules souches pluripotentes, multipotentes, unipotentes ou déjà différenciées.  [...] Pour les cultures primaires, ben ca dépend des cellules utilisées. Si on fait une culture primaire d'hépatocytes par exemples, les cellules sont très différenciées, si on fait une culture primaire de précurseurs, elles seront unipotentes/multipotentes, si on fait une culture primaire de ESC, elles seront pluripotentes.  [...]

[Biochimie] matrigel et Cellules satellites

je réalise des cultures primaires de cellules satellites de souris sur du matrigel.  [...] Si tu utilises la collagénase tu vas détacher tes cellules. C'est curieux que le matrigel interfère avec le tampon de lyse. As tu essayé d'autres tampons de lyse Le coating matrigel est indispensable Tu ne peux pas faire la culture sur un coating plus simple.  [...]

[Biologie Cellulaire] Neurone sans glie

je projette de travailler sur des cultures primaires de neurones. Le problème dans cette configuration c'est que l'on se retrouve avec une population hétérogène (neurones et cellules gliales). Il existe pour cela un produit (cytarabine) utilisé en chimiothérapie qui joue sur le fait que contrairement aux cellules nerveuses, les cellules gliales se multiplient et sont sensibles à ce composé (meurent) On se retrouve donc avec des cultures neuronales purifiées sans glie, par contre ces mêmes neurones n'ont plus d'activité.  [...] J'ensemence avec du milieu avec sérum (DMEM avec 10% FBS) (pour avoir de belles cultures fonctionnelles, il vaut mieux commencer avec des gliales). Puis, quand les cellules se sont bien attachées au fond de la boite (avec le coatting) je remplace le milieu avec du neurobasal + 2% complément B27 (je rajoute 0,5 mM glutamine et 100 U/ml de penicilline et streptomycine) et je laisse incuber une semaine (tous les 2 jours je change le 1/3 du milieu).  [...]

[Biologie Cellulaire] Nombre de passages

J'aurais une petite question concernant la culture cellulaire. Auparavant je n'avais fait que des cultures primaires de fibroblastes, et je devais faire attention au nombre de passages de mes cellules.  [...] Et moi non plus je ne comprends pas bien l'autre question... On maintient nos cellules parceque c'est notre outils de travail et qu'il faut bien les maintenir en culture pour pouvoir maintenir la lignée et travailler avec.  [...]

[Biologie Cellulaire] Inconvénients de la trypsination

Voilà, mon professeur nous a présenter le cours de la mise en culture des cellules en nappe sous forme de diagramme avec pleins de flèches, en temps normale j'aime beaucoup cette méthode, mais voilà y a une partie du schéma que je n arrive pas a comprendre et c'est. les inconvénients de la trypsination.s.  [...] Elle sert à détacher les cellules de leur support en digérant la matrice. Seulement elle attaque aussi les cellules elles mêmes, créé un stress assez important. Et si tu travailles avec des cultures primaires que tu peux mettre jusqu'à 3h à isoler, mieux vaut aller vite et inactiver rapidement la trypsine.  [...]

[Biologie Cellulaire] techniques de cultures en biocell

oui, en fait jvoulai parler des milieux de cultures des cellules, dan quels différents endroits on peu les mettre en culture et quel influence cela porte sur eux.  [...] On peut aussi faire des cultures sans support mais en suspension, par exemple pour cultiver certaines lignées de cellules circulantes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture primaire de fibroblastes de souris

Voici mon problème, je garde toujours un peu de cellules pour les remettre en culture mais à partir de là, elles changent de morphologie et sont plus grosses, pas mal d'entre elles meurent et beaucoup de débris sont présent dans le surnageant de culture. Je suppose que ce sont les signes de sénescence de la culture primaire.  [...] J'ai besoin des retour de personnes qui font de la culture primaire de cellules de souris, je n'ai jamais rencontré ce type de problème avec des cultures primaires de fibroblastes humains (bien plus facile à cultiver... ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfection Huv-ec-c

Cela fait 4 semaines que je tente désespérément de transfecter des cellules Huv-ec-c (provenant d'ATCC, pas des cultures primaires) avec un plasmide pEGFP-N3 dans lequel est inseré l'ADNc codant pour ma protéine d'intérêt (et j'ai vérifié qu'il y était).  [...] Depuis cette semaine, je tente un nouveau transfectant qui est le jet-PEI Huvec (normalement pour culture primaire mais je ne vois pas pourquoi cela ne marcherait pas en cellules en lignée) et rebelote. rien du tout.  [...]

la chimiothérapie

Nous avons eu l'idée d'appliquer une molécule composante de la chimiothérapie (ou une bactérie ressemblant) sur une cellule cancéreuse et sur une cellule saine. Le problème est que nous avons aucune idée des composants de la chimiothérapie ni comment avoir une cellule cancéreuse a observer.  [...] La manipulation des cellules cancéreuses se fait dans un labo de niveau P2 normalement, donc dans un lycée je doute que vous soyez autorisé à en manipuler. Je n'ai pas d'idée accessible à un projet lycéen, sinon montrer la toxicité d'un agent chimiothérapeutique sur des cellules saines immortalisées par exemple comme les COS-7 ou les HEK293, ou des cultures primaires.  [...]