• Forum - Cellules, Plasmide, Génome

[Biologie Moléculaire] Expression ectopique

j'ai besoin de votre aide afin de savoir comment réalise-t-on une expression ectopique sur un facteur de transcription dans le cadre d'une différenciation.   [...] On peut tout simplement transfecter un plasmide codant le facteur de transcription. Reste à savoir si l'expression du facteur de transcription doit être stable dans le temps. Si c'est le cas, alors il faut sélectionner les cellules ayant intégré le plasmide à leur génome. transfection stable.  [...]

proteine ou cellule stable ???

i) transfecter avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt, puis effectuer sa manip sur les cellules (dans ce cas, toutes les cellules n'exprimeront pas la protéine, et celles qui le font, élimineront en quelques génération le plasmide).  [...] ii) transfecter stablement avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt et un gène de résistance, on ajoute un agent de sélection, donc seuls les cellules qui possèdent le plasmide survivent, et au final, il y aurait intégration du plasmide dans le génome.  [...]

[Biologie Cellulaire] Stabilité de l'ARNm

Quand tu veux exprimer une protéine dans une cellule, tu peux transfecter les cellules de manière à ce que ton ADN (plasmide le plus souvent) reste longtemps dans ta cellule. c'est la transfection stable. Tu as alors 2 possibilités. soit tu peux intégrer ton gène dans le génome cellulaire par recombinaison homologue, soit tu utilises des plasmides auto-réplicatifs qui ne s'intègreront pas (on appelle ça des épisomes).  [...] soit tu peux intégrer ton gène dans le génome cellulaire par recombinaison homologue, soit tu utilises des plasmides auto-réplicatifs qui ne s'intègreront pas (on appelle ça des épisomes).  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires.  [...] Mais ce que je ne comprends pas très bien c'est pourquoi on peut utiliser des plasmides pour faire exprimer des gènes d'intérêt dans des cellules eucaryotes, et ce sans intégration dans le génome. OU en tout cas, on ne nous a jamais mentionné une telle condition.  [...]

Virus = vivant ??? - Page 2

D'autres requiert la division cellulaire tout simplement parce qu'il n'ont pas acces au genome. Lors de la division cellulaire (mitose), le genome n'est plus cloisonne par la membrane nucleaire et est expose au cytoplasme et donc a des potentiels virus qui peuvent en profiter pour s'integrer.  [...] Simplement tout ces gènes sont groupé chez les alpha-protéobactérie sur un méga-plasmide ayant des caractéritiques atypique par rapport au génome cellulaire (taux de G+C de l'ADN plus faible pour le plasmide, usage du code génétique différent etc etc...). De plus la transformation in vitro de souches non-symbiotique en une souche symbiotique par ajout de ce méga-plasmides a été démontrée expérimentalement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

Pensez-vous qu'il soit possible d'isoler et purifier un plasmide (EBV = pas d'intégration et expression à long terme sous sélection) à partir de mes lignées cellulaires transfectées.  [...] Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression d'un gène d'enzyme !

un viel homme a isolé une petite quantité d'attractase,une enzyme produisant une phéromone humaine puissante,à partir d'echantillon de cheveux de célébrités hollywoodiennes.Pour produire de l'attractase à son usage personnel,il a obtenu un clone génomique complet du gène de l'attractase,l'a connecté à un promoteur bactérien puissant dans un plasmide d'expression et a introduit le plasmide dans des cellules d'E coli.  [...] il a été anéanti de découvrir qu'aucune attractase n'etait produite par les cellules.Quelle est 'explication de son echec.  [...]

[Biotechnologie] RNA interference : siRNA, shRNA

- Dans le cas des shRNA, la séquence codant pour le shRNA est contenu dans un vecteur, comment le vecteur est-il intégré dans l'animal A-t-on une insertion dans le génome (dans ce cas il serait possible de faire un genre de Knock-in), ou le plasmid reste-t-il simplement dans le nucleus, et exprime le shRNA (possibilité de passage à la cellule fille ).  [...] En culture cellulaire, si le vecteur est un plasmide, il ne s'intègre pas dans le génome mais peut se répliquer. Cependant il risque d'être expulser si il n'y as pas de pression de sélection comme une résistance à un antibiotique. Le moyen le plus sure de faire une lignée stable est d'utiliser un vecteur lentivirus, qui intègre la séquence du shRNA (ou de n'importe quel gène) dans le génome.  [...]

[Microbiologie] Bactérie et transposon

Je souhaiterai savoir d'où proviennent les transposons. Du génome de la bactérie du plasmide ou d'un plasmide d'une autre bactérie.  [...] Les transposons sont des séquences d'ADN capables de changer de localisation dans le génome. Ils peuvent se trouver au niveau du chromosome ou d'un plasmide mais ils n'apparaissent pas à l'état libre. Ils peuvent être transférés d'une bactérie à l'autre.  [...]

[Microbiologie] clonage dans un plasmide p gex d'une séquence de génome de mycoplasma meleagridis

s'il vous plaît aidez moi mon encadreur m'a demandé de poursuivre les travaux de recherche de l'étudiante qui a quitté le labo sans laisser des documents sur les tubes qu'elle a laissé j'ai trouvé BL21 INSERT Mycoplasma meleagridis je ne sais ce que je dois faire à l'étape suivante tout ce que je sais c'est qu'elle a cloné un fragment d'ADN DE MYCOPLASMA MELEAGRIDIS dans la souche Ecoli TOP 10 APRèS BL 21.  [...] On peut quand même dire que la première chose à faire devant des plasmides dont le contenu est vaguement connu, voir douteux, est de les séquencer pour déterminer au nucléotide près ce qu'ils contiennent. En gros, reconstituer la documentation qui vous fait défaut.  [...]