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[Biologie Moléculaire] Immunocyto - Comment améliorer la fixation ?

En fait, moi, je cultive mes cellules en plaque 24 puits sur des petites lamelles de verre. Une fois mes traitements terminés, je rince ces lamelles avec du PBS plusieures fois et je fixe avec du formaldéhyde. Là je suis toujours avec des petites lamelles dans mes puits.  [...] Ce que tu dis à propos des polylysines m'intéresse beaucoup. Je me demandais si cela pouvait être équivalent à la gelatine En temps normal lorsque je passe mes cellules en flasque, je les cultive sur gelatine pour favoriser leur adhérence. Je ne le fais pas lors des immuno car je redoute de ne pas pouvoir retirer mes petites lamelles de verre.  [...]

Etalement de la chromatine

Si c'est le cas, le principe c'est cytocentrifugation dans une solution hypotonique. en gros tu projette des cellules sur une lame de verre et tu fait du FISH dessus. google. cytocentrifugation.  [...] Alors la différence, c'est que la microscopie électronique va détecter  mais je vous en ai parlé ça Je vous l'ai dit comme ça en passant, mais la différence c'est le principe de la microscopie électronique. Ça consiste à faire des coupes de cellules, avec un appareil qui contient une lame de verre, une sorte de ptit couteau en verre qui passe.  [...]

[Divers] fixation de coupe de tissu sur lame de verre pour un microdissecteur laser

j'utilise un microdissecteur laser. Cet appareil permet de récupérer spécifiquement les cellules qui nous interessent sur des coupes de tissus. Je travaille sur des coupes de tissus provenant du colorectal. Mon problème est que je n'arrive pas à décoller les cellules car elles sont trop fixées à la lame de verre.  [...] je veux récupérer la totalité du contenu intracellulaire, ADN,ARN protéines. Les tissus proviennent d'une tumorothèque. je prends mes tumeurs du colon ensuite je fais des coupe de 10µm d'épaisseur et je les mets sur une lame de verre. Mon problème est la. Je veux que ma coupe de tissu du colon se fixe sur la lame de verre mais pas très fort car sinon au microdissecteur laser les cellules ne peuvent pas se coller au film.  [...]

Regard dans les yeux ?

Voilà maintenant mon problème, il m'arrive, lorsque j'hôte mes lunettes, avec une certaine lumière d'ambiance, genre couché de soleil, de voir, très très pr ès, des cellules sphériques uniques (voir les pièces jointes), sur des plans invisibles dans le champ de profondeur (limité à quelques cm), comme si je regardais une lame de verre au microscope.  [...] Cellules dégradées de l'humeur vitrée, cela s'accroît avec l'âge (désolé). La fatigue oculaire est aussi une raison, on le remarque particulièrement lors de longues observations au microscope ou au téléscope (mais l'on s'habitue). A 62 balais je suis bien obligé de faire avec.  [...]

Dénombrement E.coli

Il s'agit de cellules qui resemblent à des lames de microscope. Sur chaque cellule est gravée une grille de carrés dont on connait la surface. Sur base d'une estimation de la hauteur de liquide pr ésent entre la grille de comptage et une lame de verre couvre-objet, on peut arriver à estimer le volume de liquide pr ésent sur la grille.  [...] A l'aide d'un microscope il suffit de compter le nombre de bactéries pr ésentes sur la surface considérée. Tu as par exemple 100 bactéries sur 4 carrés, ce qui fait 100 cellules sur 10 µl (j'invente ce nombre, la correspondance est notée sur la cellule) et tu peux alors passer au nombre de cellules par ml (qui est souvent la référence).  [...]

Protocole de marquage pour microscopie confocale

Je veux marquer une cellule et voir si la molécule que je mets en pr ésence de cette cellule est internalisée et si oui, où (dans les vésicules).  [...] Dans un premier temps je voudrais réaliser une lame avec mes cellules seules et une lame avec mes cellules seules + ma molécule liée à son fluorochrome pour montrerque la fluo est dû à ma molécule et pas à de l'autofluorescence.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cellules epithéliales

Sous l'épithelium tu as un autre tissus constitué d'autres cellules qui ne sont pas des cellules epithéliales, c'est le tissus conjonctif. La lame basale se situe entre l'épithélium et ce tissus conjonctif et sert donc de barrière entre les deux et surement aux échanges entre les deux.  [...] Certes, c'est un raccourcis que de dire qu'il existe deux grands types d'épthéliums. Mais c'est pour généraliser, on ne va pas e lancer dans la classif des épithéliums qui a le mérite d'être longue et fastidieuse. comme vous l'avez bien avancé selon le nombre de couches, la forme des cellules, la kératinisation.  [...]

Méthode de marquage - HaloTag

Si j'ai bien compris la brochure, en gros au lieu d'avoir une GFP comme protéine de fusion, c'est le Halo tag qui est couplé à la protéine d'intérêt. Le principe a l'air assez simple, en gros on peut ensuite coupler n'importe quoi sur le Halo (billes, biotine, fluorophore.   [...] ..). Ce qui fait qu'on peut l'utiliser pour localiser la protéines d'intérêt dans un tissu ou une cellule avec la fluo, mais aussi coupler avec des billes pour faire un réaction biochimique, ou encore fixer la protéine sur une lame de verre, le tout sans devoir recommencer le clonage à chaque nouvelle application.  [...]

[Génétique] Cartographie des DSB par ChIP...

purification. Et c'est là qu'on décide ce que l'on fait. puisque ce pool de de fragments d'ADN marqués est petit, on peut amplifier par PCR et déposer les amplifiats sur gel (= ChIP-PCR) ou directement hybrider sur lame de verre (ChIP-on-chip).  [...] Ah ok. Il n'est pas pr écisé dans mon cours s'il s'agit d'une PCR en temps réel ou pas... Mais alors, s'il s'agit d'une PCR classique (donc qualitative), quel intérêt Je veux dire, le fait d'avoir des fragments marqués par immunoprécipitation me dit que j'ai cassure et l'hybridation sur lame de verre me dit où exactement elle est située. Donc, pourquoi faire une ChIP-PCR.  [...]

[Biologie Cellulaire] Histologie : les épithéliums

alors les cellules épithéliales ne se divisent jamais c'est pour ça le remplacement est assuré par l'assise génératrices.  [...] donc toujours on trouve les cellules génératrices même qu'on a un tissu simple car l'assise génératrice n'appartient pas au cellules epithéliales.  [...]