• Forum - Cellules, Couple, Anticorps

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

- soit à bousiller les cellules fixées de manière à libérer un fragment protéique couplé aux anticorps primaires et secondaires.  [...] Pour le tester, tu prend le fluorophore seul (enfin le couple avec anticorps bien sûr) et tu lui fais subir ces conditions, avec un témoin négatif ne subissant rien du tout. En faisant le comparatif, tu t'apercevras vite si tes conditions de récupération de l'anticorps couplé au fluorophore sont bonnes ou pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

j'ai fixé mes cellules avec du méthanol pur froid (-20°C) 48 heures apres la transfection 10 min, à 4°C. J'ai lavé avec du PBS, incubé avec mon anticorps anti-V5 (dilué au 1/200ème) 1h à 37°C, relavé avec du PBS et incubé 1h à 37°C avec mon anticorps anti IgG de souris couplé au FITC.  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.  [...]

[Biotechnologie] cytométrie de flux/épifluorescence

la cytometrie de flux est une technique qui permet de détecter la taille, la granulosité d'une cellule ainsi que la fluorescence de protéines cellulaires (protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome) ou de l'ADN (ex intercalant fluorescent de l'ADN).  [...] Un microscope à épifluorescence est un microscope muni de faisseaux laser, qui permet l'observation d'échantillons tels que des cellules possédant des protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome.  [...]

Marquage anticorps secondaire

j'ai pas compris cet extrait... On parle de réaction directe quand le marqueur est directement couplé à l'anticorps primaire, et de réaction indirecte quand on utilise un anticorps secondaire (fabriqué chez l'espèce B) couplé au marqueur dirigé contre l'anticorps primaire (fabriqué chez l'espèce A).  [...] notre objectif est d'avoir le complexe anticorps-antigéne mais dans la derniere phrase il s'est concentré sur le couple marqueur et anticorps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage de l'activité peroxydase

Pourquoi ne pas essayer de perméabilisé la cellule pour vos anticorps (couplé à un fluorochrome) qui se fixeraient sur les péroxydases Je ne sais pas si expérimentalement c'est faisable.  [...] 2. Que je plante la fixation / l'emission d'un signal correct pour tous mes autres anticorps (j'utilise un mix de 4 ou 5 anticorps, tous membranaires).  [...]

[Immunologie] [Cyto"gramme"] abs & ordonnée?

Ainsi en fonction du marqueur que tu doses (grace à l'anticorp couplé au fluorochrome) tu peux discriminer des populations de cellules.  [...] Si je comprends bien c'est que la BrdU s'insère dans la double hélice en phase S, par l'intermédiaire d'une sonde, qui est une portion d'ADN... Et cette portion d'ADN-sonde qu'on a greffé en quelque sorte sur les ADNs natifs, on peut y adjoindre un des fluorochromes (via anticorps sur brome), avec par exemple en l'occurrence du FITC... (coloration verte.).  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

De la même façon, l'anticorps secondaire est une immunoglobine anti-lapin obtenue en injectant des antigènes de lapin dans une chèvre (anticorps disponibles dans le commerce). Cet anticorps secondaire est couplé à une enzyme peroxydas e obtenue chez le radis ou le raifort. test elisa.png.  [...] NB. je ne suis pas expert dans le domaine mais pourquoi avoir choisi trois anticorps Ne pouvait-on pas couplé la peroxydase à l'anticorps anti-loup directement.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Je ne comprends pas bien. On peut tout à fait faire un western avec SDS et utiliser un anticorps couplé à la péroxydase. Le SDS agit pendant la migration mais une fois que les protéines sont sur la membrane, il n'y a plus de SDS et si il en reste il disparaît avec les lavages donc aucun problème pour la péroxydase (et d'ailleurs intuitivement ça coule de source car les anticorps que vous allez utiliser, avant la péroxydase, nescessitent leur conformation 3D ce qui prouve que le SDS ne bouleverse pas la manipe une fois que l'on est sur la membrane).  [...] Maintenant vous pouvez tout à fait faire un gel non dénaturant sans SDS si vous voulez garder la conformation native des protéines et conserver les complexes, mais cela n'a rien à voir avec l'utilisation ultérieure d'un anticorps couplé à la préoxydase.  [...]

[Biologie Cellulaire] Différence entre l'utilisation d'un fluorophore et d'une molécule fluorescente

...) alors que les non protéiques servent a faire des marquages a postériori, c'est à dire qu'on doit les fixer a la cible d'intérêt par un moyen ou un autre (affinité (ex phalloidine texas red), couplé a un anticorps (par exemple anti actine fluoresceine), marqueur de compartiment cellulaire (exemple mitotracker).  [...] A partir de ça, on fait un peu ce qu'on veut, que ça soit la GFP ou un marqueur non protéique, on peut les visualiser en microscopie photonique, trier des cellules, faire de la video, etc.  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence ???

Cet anticorps est lui même reconnu par un anticorps secondaire qui lui est souvent couplé à un fluorophore (c'est simple tu commandes simplement cet anticorps couplé et tu l'utilises).  [...] L'exemple le plus courant est le marquage à la fluoresceine ( http.//fr.wikipedia.org/wiki/Fluoresc%C3%A9ine ). On fait réagir l'anticorps avec de de la FITC (fluoresceine isocyanate http.//fr.wikipedia.org/wiki/FITC ). La FITC reagit avec les lysines en formant une liaison thiouree covalente.  [...]