• Forum - Cellules, Constructions, Vecteur

Transfection cellules Jurk 4

Je souhaiterai transfecter des cellules Jurk 4 avec différentes constructions dans le vecteur PXM139. Si possible par electroporation. Est-ce possible Si oui, quelqu'un pourrait-il me fournir un protocole.  [...] J'avoue avoir souri en lisant votre post. Les cellules Jurk 4 n'existent pas, vous voulez parler de Jurkat je pense ^^. des cellules immunitaires immortalisées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

Tout dépend de la longueur de promoteur que tu veux mettre en amont du gène rapporteur. S'il n'est pas très long, tu peux réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région promotrice que tu désires. En 5' des amorces tu ajoutes la (les) séquence(s) de restriction correspondant au(x) site(s) de restriction que tu as choisi sur ton vecteur pour l'intégration du promoteur.  [...] Ainsi tu as des bactéries sur la membrane de nitrocellulose. Ensuite, tu réalise une hybridation de sondes chaudes spécifiques de ton promoteur, tu révèles en autoradiographie et tu vois quelles colonies sont marquées. Pour être sûr que ton promoteur est entier, tu peux éventuellement faire deux répliques.  [...]

[Biologie Cellulaire] Comportement étrange HEK293 EBNA transfectées

Les cellules commencent à se décoller, elles perdent leur forme (leur contour devient strillé), en plus de cela, de nombreux débris sont présents dans le milieu ainsi que beaucoup de granules de stress dans les cellules….  [...] J'ai adopté une nouvelle stratégie, vu que faire et défaire c'est toujours travailler, j'ai décongelé une ampoule de HEK 293 non transfectées d'un stock assez ancien (n'ayant pas été passé un trop grand nombre de fois) et je viens de re lancer 10 transfections différentes en parallèle, pour le moment les cellules vont bien même si je constate une efficacité de transformation de l'ordre de 20 % grand maximum avec de la Lipofectamine 2000 ou LTX d'Invitrogen.  [...]

coup de soleil

Bonjour, l'augmentation de la chaleur est principalement secondaire à une augmentation du flux sanguin dans cette zone, qui lui même est secondaire à une réaction inflammatoire. Le coup de soleil est une brûlure, une mort cellulaire.  [...] Augmention du flux sanguin global dans la zone, messages par les cellules locales, donc augmentation de l'arrivée de cellules extra locales. Principalement cellules et protéines de l'inflammation qui ont beaucoup de rôles, bénéfiques et parfois moins. destructions des éléments étrangers microbes, cellules mortes,  [...]

[Biologie Moléculaire] Gfp

Quelqu'un saurait-il me dire s'il est possible d'effectuer une transfection à l'aide d'un vecteur contenant uniquement le gène GFP (ou autre prot fluorescente), çàd sans l'utiliser en protéine de fusion Mon but est de suivre un clone cellulaire que j'utilise en coculture (comme cellules nourricières) avec un autre type cellulaire et à la fin de la manip j'ai une étape de lavage pour me débarrasser de mes cellules nourricières, mais j'aimerai un système me permettant de quantifier ou en tout cas de visualiser ces dernières.  [...] oui c'est tout a fait possible, il existe plein de constructions, adénovirus ou autres permettant l'expression de GFP dans des cellules eucaryotes.  [...]

[Biotechnologie] question pomme de terre OGM

La possibilité qu'un vecteur transgénique couramment utilisé dans des variétés végétales transgéniques puisse exercer des effets biologiques sur la muqueuse du tractus gastro-intestinal indique qu'il pourrait en être de même avec d'autres végétaux, dont le soja, qui contiennent des constructions génétiques similaires, en particulier celles codant pour des lectines, concluent les auteurs.  [...] L'étude des chercheurs écossais comporte trop peu d'animaux dans chaque groupe et ne comportait pas de contrôles, d'une part des rats qui auraient reçu un régime alimentaire avec 15% de protéines, d'autre part des pommes de terre contenant un vecteur 'vide', c'est-à-dire une construction génétique ne comportant pas de gène d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfection Huv-ec-c

Entre temps, j'ai pu testé mes constructions plasmidiques sur d'autres cellules et là la transfection lipofectamine s'est bien realisée.  [...] - Pour l'expression de la GFP, j'ai testé ces mêmes constructions dans un autre type cellulaire (Huh7, que je connais mieux et pour lesquelles je n'ai jamais eu de problème de transfection) et la protéine s'exprime bien avec son tag GFP.  [...]

électroperméabilité

comme vous pouvez le constater dans mon post précédent je ne prétend pas que la thèse traite le sujet des téléphone portables. Je dis simplement que cette thèse est trés interressante pour l'étude des effet des antennes, de leur champ éléctromagnétique sur les cellules du corp humain.  [...] Mais bon, encore une fois, rien n'indique qu'un rayonnement (téléphone, ceinture de massage ou autre) puisse avoir cette effet sur les cellules. Les recherches ont été faites sur des GUVs, qui même s'ils représentent bien la membrane lipidique, n'a rien à voir avec la membrane plasmique des cellules (car il n'y a aucune protéines membranaires ou trans-membraires dans ces constructions).  [...]

Angiogenèse tumorale

Pour simplifier, cette hétérogénéité de perfusion entraine une hétérogénéité des apports. globalement il y en a beaucoup (trop) mais certaines zones en manquent (thrombose ou vaisseaux non fonctionnels, etc.) et ces zones (variables dans le temps) vont nécroser et/ou émettre des facteurs pro-angiogéniques et contribuer à augmenter l'angiogenèse malgré ce sur apport global dont certaines parties de la tumeur profitent et prolifèrent.   [...] En gros, la construction est tellement anarchique quelle en est en grande partie non fonctionnelle et cette dernière va provoquer de nouvelles constructions vasculaires (tout aussi anarchiques) mais une autre grande partie de cette vascularisation est fonctionnelle, utile et profite aux cellules tumorales (par l'apport accru de la vascularisation qui marche dans cette partie).  [...]

proteine

Synthèse in vivo, dans la cellule, donc la synthèse classique, où il peut y avoir beaucoup de variantes. synthèse dans organisme modèle, synthèse dans organisme d'origine (la plus normale ), synthèse dans bactérie,...à condition d'adapter les constructions des vecteurs d'expression lorsque ceci est nécessaire.  [...] Je ne sais plus dans quel sens cela se passe, mais le principe consiste effectivement à protéger une des deux extrémités puis de fair réagir l'autre avec un seul nucléotide introduit dans le milieu le nucléotide ainsi fixé aura son extrémité libre de protégée, il ne pourra donc pas réagir avec ses semblables.   [...]