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[Biologie Cellulaire] Immunofluoresence

N.B. Voilà ce qui est écrit. Les cellules HEK293T ont été incubées avec l'Alexa488-labeled AAV2 (green) pendant 30 min à 4°c pour sinchroniser l'infection et elles ont été transférées à 37°c pendant 5 et 10 min. Après incubation, les cellules ont été fixées, perméabilisées et immunostained avec un anticorps contre la clathrine (red).  [...] Mais si tu veux mon avis ils veulent savoir si ton virus AAV est endocyté via les puits de clathrine des cellules HEK. Donc ils incubent les cellules avec le virus couplés au fluorophre Alexa 488 laissent incubé quelque temps, ensuite ils perméabilisent les cellules pour faire entrer les anticorps couplés a un autre fluorophore (rouge celui la) et dirigé contre la clathrine.  [...]

[Immunologie] Déficience en béta-2-microglobuline

Dans les années 1990, l'inactivation génique de plusieurs gènes intéressants des molécules du système immunitaire a été réalisée, notamment les molécules impliquées dans la reconnaissance du SOI et du NON-SOI. En particulier, différentes équipes ont produits des souris déficientes pour la ²2-microglobuline, le CD4 et l'une des chaines constituant la molécule de CD8.   [...] L'analyse par cytométrie en flux des cellules lymphoïdes présentes dans les ganglions et le thymus a été réalisée au moyen de plusieurs anticorps couplés à des fluorochromes de différentes natures afin de permettre une étude de co-marquage (anti-CD3-FITC, anti-CD20-FITC, anti-CD4-FITC, anti-CD8-PE).  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelle stratégie adopter?

est ce que je dois prendre des cellules hépatiques non transfectées comme temoin pour la localisation il me semble qu'il serait judicieux de faire une immunohistochimie mais est ce que je detecte les 2 proteines dans la meme cellule et ceci avec 2 anticorps différents couplés avec une fluorescence différente.  [...] Par contre je ne sais pas trop s'il faut faire avec des cellules transfectées ou pas. Je pense que ça dépend des anticorps dont tu disposes. Si tu as des Ac anti-PG1alpha et anti-SIRT1, des cellules non transfectées suffisent peut-être. Sinon tu dois pouvoir trouver facilement dans le commerce des AC-anti GFP (pour la GFP peut-être même que ça fluorescence suffit et qu'il n'y a pas besoin d'AC) et anti-luciférase à utiliser sur des cellules transfectées.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage

L'immunomarquage cellulaire permet de détecter un antigène spécifique (d'origine cellulaire ou microbienne) et éventuellement d'en préciser la localisation subcellulaire au moyen d'anticorps. Ces anticorps primaires peuvent être directement couplés à une molécule rapporteur (iode radioactif, fluorochrome, enzyme ou particules d'or).  [...] Alternativement, ils peuvent être détectés à l'aide d'anticorps secondaires marqués. Ces techniques peuvent être rendues plus sensibles par l'ajout d'étapes supplémentaires d'amplification.  [...]

[Immunologie] test ELISA

Le réactif 2 est composé d'anticorps monoclonaux de souris et d' anticorps polyclonaux de chévres contre l'Ag HBs,ces anticorps sont couplés à la peroxydase.  [...] * L'avantage d'une solution concentrée (par exemple 20X), c'est de gagner de la place. Donc si tu ne penses pas écouler ton kit dans l'immédiat, mieux vaut prélever 10 mL (par exemple) et diluer 20 fois (donc volume final... 200mL). Si tu fais ça, indique sur ta solution Stock qu'elle ne contient plus que 60mL, sinon le suivant qui passera derrière toi et qui diluera normalement se trouvera avec un lavage moins concentré.   [...]

dosage immunologique

lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait à la maison.  [...] Dans le cas des tests de grossesse, les anticorps anti HCG sont couplés à une molécule colorée. Ces anticorps sont libres et sont présents dans la tige du test qui sera mise en contact avec l'urine. Dans ce cas, le liquide remonte par capillarité, entrainant les anticorps.  [...]

Test ELISA

Mais sachant que plusieurs anticorps secondaires (polyclonaux) peuvent se fixer sur un seul anticorps primaire, tu multiplies la pr ésence de ton marqueur.  [...] Mieux vaut avoir des anticorps anti souris couplés à ton marqueur. Tu les garde en stock et tu les utilise indifferament de l'anticorps primaire tant qu'il est de souris. Donc plus besoin de bidouiller ton anticorps precieux.  [...]

[Immunologie] Lire une courbe de cytométrie de flux

(un avis quand même. la superposition de la courbe en fond blanc et de la courbe en fond gris signifie que la cellule n'exprime pas les CDs, alors que lorsque la courbe a fond gris s'exprime en dehors de la courbe a fond blanc, il y a bien présence de Cds a la surface cellulaire.  [...] En effet, les histogrammes (et non les courbes) sur fond blanc sont obtenus avec les anticorps isotypiques couplés au même fluorochrome que pour le réel anticorps, ça permet de définir le bruit de fond.  [...]

[Biochimie] Ihc

De plus, je ne comprends pas la notion de témoin négatif. On prend des anticorps primaires de même type (isotype) que ceux utilisés dans l'expérience mais non spécifique à l'antigène considéré. Mais si ces anticorps sont isotypes, ça veut dire qu'il vont fixer le même antigène non Donc, je ne vois pas très bien la notion de témoin négatif obligatoire en IHC.  [...] Si, c'est toujours mieux d'avoir recours à un anticorps primaire directement couplé, la spécificité sera toujours meilleure et ça permet de gagner du temps et des réactifs. Mais, ce n'est pas toujours possible, tout simplement parce que tous les anticorps n'existent pas directement couplés.  [...]

[Biologie Cellulaire] Southern Blot, Northern Blot et Western Blot

Ce gel est un peu compliqué à manipuler alors on fait migrer les protéines sur une feuille de nitrocellulose sans perde l'ordre des protéines. Pour finir on ajoute des anticorps qui vont reconnaitre spécifiquement les protéines que tu veux étudier. Ces anticorps sont couplés à une sonde lumineuse, chimique, radioactive.  [...] bref quelque chose qu'on peut mesurer. Plus le signal de l'anticorps est présent plus ta protéine était présente dans ton matériel de base.  [...]